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TALEN 敲除基因
实验分类：
实验动物
最新修订时间：
简介
与传统通过同源重组实现基因敲除方法不同，利用 TALEN 技术是通过 NHEJ 修复方式进行模式动物的靶向基因敲除，不需要进行 ES 细胞的操作。只要将 TALEN 的 mRNA 显微注射到模式动物受精卵中，可实现直接基因敲除。由于不同的模式生物，铺助生殖技术的不同，使用 TALEN 敲除基因的方法也有所不同。主要是下面两种方式：①受精卵显微注射 TALEN mRNA 敲除基因；②TALEN 结合核移植技术或 ES 细胞进行基因敲除。
来源：丁香实验团队
操作方法
对于小的模式动物，如小鼠、大鼠、斑马鱼，由于采集受精卵数目多，可以采用显微注射 TALEN mRNA 方法到动物的受精卵中实现全身基因敲除。对于猴子、树驹等不可大规模获取卵巢、采集卵母细胞的非经济动物，也可采用显微注射 TALEN mRNA 方法敲除基因。大致步骤为先以 TALEN 质粒为模板，体外转录出 mRNA，再显微注射 TALEN mRNA 到受精卵中。
TALEN 结合核移植技术进行基因敲除对于可以通过细胞核移植技术实现动物克隆的动物，比如猪、牛、羊等，虽然采用直接显微注射 TALEN mRNA 的方式可行，但是由于受精卵数目有限，这种方法并不是非常高效。通过 TALEN 与细胞核移植技术结合，可以高效地对这些动物物种进行基因敲除，甚至基因敲入等操作。大致的流程是先通过 TALEN 技术在这些动物的成纤维细胞上实现基因突变，如基因敲除或基因敲入，再将这些完成基因操作的细胞的细胞核，通
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