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        流式细胞术检测检测胎肝 Lin-c-Kit+Sca-1+细胞数

        相关实验:流式细胞术检测实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        器材:


        ① 流式细胞仪管


        ② 手术器械


        ③ 1 mL 注射器


        ④ 流式细胞仪(BD FACSCalibur)。


        试剂:

        ① e-Kit-APC

        ② Sca-1-FITC

        ③ phycoerythrin-conjugated lineage marker cocktail

        ④ containing CD3-PE

        ⑤ CD5-PE

        ⑥ B220-PE

        ⑦ Gr-1-PE

        ⑧ Ter119-PE(eBioscience)

        ⑨ 1x PBS

        ⑩ FBS。

        步骤

        流式细胞术检测检测胎肝 Lin-c-Kit+Sca-1+细胞数的基本过程可分为如下几步:


        A 收集 E14.5 胎肝细胞,1 mL 注射器分离胎肝成单细胞悬液,并用细胞滤器过滤细胞悬液。


        B 胎肝总细胞数计数。


        C 2% FBS/PBS 液洗一次。


        D 分别加入 c-Kit-APC(1:800),Sca-1-FITC(1:800),phycoerythrin-conjugated lineage marker cocklail(1:800),Ter119-PE(1:800)。


        E 4 ℃ 孵育,30 分钟,避光。


        F 加 500 mL 2% FBS/PBS 液,微振荡。


        G 250 g 离心 5 分钟。


        H PBS 液离心洗 2 遍,每次 5 分钟;流式细胞仪分析 Lin c-Kit'Sca-1'细胞数。结果示例如图8-8-3。


        流式细胞术检测检测胎肝 Lin-c-Kit+Sca-1+细胞数

        注意事项

        1. 正式收取数据前要先用空白对照和单染的阴性对照,做好仪器的校正工作。

        2. 上流式细胞仪的细胞液样本绝对不容许有组织残留,否则极易引起仪器内部管道堵塞。

        来源:丁香实验

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