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        流式细胞术应用 | 囊泡检测步骤详解

        贝克曼库尔特

        6570

        实验简介

        囊泡天然存在于体液中,并稳定携带了一些重要的信号分子。囊泡相关功能的研究已经成为研究热点,并有望在多种疾病的早期诊断中发挥作用。通常因流式细胞仪无法检测低于 250nm 的颗粒,因而并不是检测囊泡微颗粒的最佳选择。

        而贝克曼库尔特公司 CytoFLEX 流式细胞仪的问世,为流式检测囊泡微颗粒开辟了蹊径。 CytoFLEX 是第一台可检测 100 nm 微颗粒的流式细胞仪,并具有可同时检测 13 色荧光、单个样本存储量大等 优秀性能,为微颗粒的检测提供了理想的检测平台。

        材料与方法

        ▶ 试剂

        ▶ 样品制备

        Sample Type全血
        Species小鼠
        Age of specimen新鲜
        Prep Method

        1. 取新鲜的小鼠全血,加入柠檬酸钠抗凝剂。用离心机 2500 xg 离心 15 min,将上清液倒掉;

        2. 画 FSC/VSSC 散点图,用 Megamix-Plus FSC beads(100, 160, 200, 240, 300, 500, 900 nm)来标定囊泡微颗粒的位置;

        3. 用 Annexin V FITC, CD41 PE and CD63 PE-Cy7 对囊泡微颗粒进行染色,用 CytoFLEX 进行检测。


        ▶ 数据分析

        1. 建立 FSC / VSSC 散点图,检测 Megamix-Plus FSC beads(100, 160, 200, 240, 300, 500, 900 nm),调整 gain 值。圈定 100 nm~900 nm 微颗粒分布区域,设定门 MP Gate。同样电压条件下,样本检测管分布于 MP Gate 门内的即为囊泡微颗粒;

        2. 建立 AnnexinV-FITC/APC 双参数散点图,通过 AnnexinV 表达量的多少,区分不同类型的微颗粒。并建立 CD63-PE/CD41-PC7 双参数的散点图,来检测不同类型的囊泡微颗粒,细胞表面抗原的不同。

        实验结果

        1. Megamix-Plus FSC beads 检测结果

        根据微球(100, 160, 200, 240, 300, 500, 900 nm)的分布,界定微颗粒的位置,将门命名为「MP Gate」。

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