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        在哺乳动物细胞中表达和鉴定核酶及短发夹 RNA 实验

        实验分类:

        其他实验

        最新修订时间:

        简介

        近几年,应 用 R N A 干 扰 技 术 (R N A i ) 进行的功能基因组研究开展得非常广泛。R N A i 在各种调节基因表达的技术中是最新的也是最成功的,这些技术一般都是以反义作用为基础的。要把反义效应因子导入细胞,有两种主要的方法:从细胞外导入已经合成的效应分子或通过适当的载体在细胞内表达效应分子。通过外源导人引起的基因表达下调是暂时的,不适合用于对半衰期较长的蛋白质的研究,而且转染效率较低或经常变化也会引起其他潜在的问题。
        作者:T.弗里德曼等,译者:殷勤伟等,本实验来自「基因转移」

        来源:丁香实验

        操作方法

        构建和表达以寡核苷酸为基础的反义盒

        构建和表达以寡核苷酸为基础的反义盒 材料 试剂 25.将混合物与细胞共同孵育(期间不需更换培养液)直到转染后 24 h 。 26.吸出培养液,向每孔加人 150ul 被动裂解缓冲液(在双萤光素酶报道系统试剂盒中提供),室温下轻柔振荡培养 15 min 。 27.在荧光/化学发光检测仪上测量报道基因的表达(参照双萤光素酶报道系统试剂盒的操作手册)。 28 以内部

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