其他实验

这一章详细地讲述了用于基因转染和基因治疗中的辅助病毒依赖性腺病毒载体(H D A d ) 的制备、扩增和大规模生产。在这一过程中，使用了适合悬浮培养的116生产细胞、 A d N G 163辅 助 病 毒 和 于 p A 28E 4 骨架的辅助病毒依赖性病毒。到目前为止 ，本文讲述的改进方法和试剂是用于高通量、高质量生产H D A d 的最有效的方法和试剂。本文同时讲述了使用标准分子生物学技术来

近来，一种基于辅助病毒的技术被用于将单纯疱疹病毒（H S V ) 扩增载体包装进病毒颗粒。这一包装技术已为细菌人工染色体（B A C ) 携带单纯疱疹病毒基因组的“无辅助病毒”方法所取代，后者可以避免H S V 基因组的同类切割/包装序列。使用优化的包装方法将D N A 重组质粒与这个扩增子质粒共转染能产生仅含有扩增子成分的包装。作者：T.弗里德曼等,译者：殷勤伟等，本实验来自「基因转移」

当前，腺 病 毒 （A d ) 感染细胞的生命周期和生物学特征已经被研究得很清楚。在 A d 病毒感染和转基因的表达中，存在三个必需的连续步骤:①病毒结合到细胞表面受体上；②内化过程；③病毒基因组转移到细胞核。本章的实验方法介绍了 A d 病毒的构建方案，即如何利用这些病毒通过—级或二级A d 受体靶向、结合并进入IE细 胞 （转导过程），以及这些病毒携带的外源基因在靶细胞内的表达（转录和翻译)作

这一章介绍通过使用2A 多肽连接的多顺反子载体从单一可读框来表达多重蛋白质的方法。当这些小的序列被克隆到基因间区时，它们允许通过在2A 多肽序列中的一个新颖的切割方式从单一的载体上高效地产丰不相连的蛋白质产物。作者：T.弗里德曼等,译者：殷勤伟等，本实验来自「基因转移」

空 泡 病 毒 （F V ) 是非致病性的反转录病毒，它能将基因有效并安全地转移到不同物种的不同类型的细胞中。这些病毒有着与其他反转录病毒不同的独一无二的复制机制 ，这是空泡病毒介导基因转移的一个优势。其反转录发生在病毒生命周期的晚期。此时，至 少 2 0 % 的病毒粒子包含具有感染能力的双链 D N A 基 因 组作者：T.弗里德曼等,译者：殷勤伟等，本实验来自「基因转移」

提供一些如何使用微型SIV 包装系统和SIV 基因转移载体来获取由S IV 发展来的高滴度和安全的慢病毒载体的方法。作者：T.弗里德曼等,译者：殷勤伟等，本实验来自「基因转移」

慢病毒载体可以被设计成复制不完全或者是复制条件依赖型（可运动型）载体。 HIV-2 载体在抗H IV 的基因治疗中更加有效，是因为它比相应的HIV-I 载体的致病能力弱，而且在感染细胞中不易 与 HIV-I 重组。本章讨论HIV-2载体的设计、应用以及它作为载体在转运有关基因的试验，特别是在抗H IV 基因治疗方面的情况。作者：T.弗里德曼等,译者：殷勤伟等，本实验来自「基因转移」

本章描述了如何使用慢病毒载体传递小干扰RNA (siR N A )介导的沉默盒。这两种技术的结合发展成为体内外长期降低特定靶标基因表达的强大工具。它结合了 RNA干扰的特异性和慢病毒载体的多功能性，可以转染多种类型的细胞。作者：T.弗里德曼等,译者：殷勤伟等，本实验来自「基因转移」

基因治疗是指通过调控目的基因的表达，在基因水平上抑制、替代或补充缺陷基因，从而恢复细胞、组织和器官的生理功能。基因治疗有体内 (h W w ) 和体外 (ex v/vo 俩 种 途径 。将目的基因在体内直接导入祀细胞从而起到治疗效果的方法为体内途径，而体外方法是由患者体内取出某一器官或组织的细胞，体外扩增后，将目的基因转入其中，建成表达外源基因的遗传修饰细胞，扩增培养后，以一定数量回植体内，达到治

造血干细胞移植是治疗恶性血液系统疾病、肿瘤放化疗及重症放射病的有效方法 Q然 而 ，由于组织相容性抗原的存在，在同种异基因干细胞移植后常发生严重的移植物抗宿主病 (G V H D ) 导致移植失败。寻找与患者组织相容性抗原完全匹配的造血干细胞十分困难，需要较长的时间，为此，开展干细胞的保存是使这类细胞择期为患者移植的重要措施。作者：裴雪涛,本实验来自「干细胞实验指南」

干细胞是指具有多向分化潜能和自我更新能力的细胞。干细胞既可以从胚胎中分离得到，也存在于多种成体组织中。干细胞的细胞周期从本质上说并无特殊之处，但是受精卵 (可以视为全能干细胞) 的细胞周期没有 G 1 期 ，从成体组织中分离得到的干细胞往往处于 G 0/G1 期。作者：裴雪涛,本实验来自「干细胞实验指南」

饲养细胞是胚胎来源的干细胞包括胚胎癌细胞 (EC)、胚胎干细胞 (ES)、原始生殖细胞 (EG) 等细胞在体外保持对称分裂不分化状态的必要条件。其作用机制不完全清楚。对于小鼠胚胎干细胞，饲养细胞分泌的 LIF 是保持其多能性的原因之一，因此，在某些鼠细胞培养中，饲养细胞或 LIF 二者有一即可。对于人类胚胎干细胞培养，饲养细胞目前仍是必需的。通常用两类细胞作为胚胎干细胞培养的饲养细胞，即原代培养的

免疫组织化学（immunohistochemistry， IHCS) 是用特异性抗体检测组织切片中抗原的一种方 法 。 在鉴定蛋白质方面，IH C 有着其他技术无法比拟的独特优点，可以将抗原检测与其在组织或细胞中的定位联系起来，这对于正常或病理组织的细胞功能研究具有重要意义。 19 世 纪 40 年代末 [1] ,Coons 首先建立了免疫组织化学法，随后被广泛应用到生物学的多个领域，包括细胞功能

环境代谢组学（environmental metabolomics) 是代谢组学的分支，主要研究有机体对环境应激过程中的代谢变化。因为这种方法不依赖于有机体基因组的知识，所以对于研究一个生态系统中的多个物种非常理想。一个有机体代谢组分的测定，原理上可以用于鉴定新的生物标志物和刺激因素的作用机制。本章介绍了生物样本中代谢物提取，使用 1 H 核 磁 共 振（nuclear magnetic reso

大多数细胞系在pH7.4生长最好,不同细胞株之间差别不大;但一些正常成纤维细胞系在pH7.4~7.7生长最好.而一些转化细胞可能在pH7.O~7.4生长得会更好些「Eagle1973].据报道上皮细胞可以维持在pHS.5〔Eisinger et al.,1979〕,但这一标准尚未得到普遍认可.对于一些特殊悄况,可通过简单的生长试验、接种率分析或特异性功能分析来确定适宜的pH，这对特殊细胞的生长可能

从哺乳动物组织和果蝇中进行 RNA 制备的标准方法的一种改进，主要包栝虫体的迅速裂解和 RNA 的均一性纯化。

食品工厂要求所排放的废水的pH 值在6.5-8.5 之间，在果蔬汗饮料厂、碳酸饮料厂、乳制品厂、啤酒厂等的生产过程中，常用大不认进行清洗容器、设备。此外，还会用到盐酸、硝酸等酸性清洗剂。所以，不仅要对原料水进行pH 值测定，对于所打电话的废水也要测定pH值，以确定是否需要对废水进行中和处理。

甲基化特异性的PCR法（Methylation-Specific PCR，MS-PCR）是 Herman等（1996）在使用重亚硫酸盐处理的基础上新建的一种方法。该方法敏感性高，主要用于作定性研究。甲基化特异性聚合酶链反应（methylation-specific PCR，MSPCR），其作用原理基于DNA经亚硫酸氢钠处理后，来自父方非甲基化序列的胞嘧啶转变为尿嘧啶，而来自母方甲基化序列则保持不变

胞外的信号被受体接受，通过Gs或Gi传递给AC，使其活化或抑制；AC被激活后，产生cAMP，cAMP激活PKA，使蛋白质磷酸化，产生细胞反应；cAMP被PDE水解而信号终止。

X-射线衍射法是测定蛋白质晶体结构的极其重要方法。生物大分子X射线晶体学是揭示分子结构与功能的科学。目前还没有一种工具能够用它直接观察到蛋白质内部的原子和基团的排列。虽然电子显微镜接近于看到大分子的轮廓。但是仍然仅限于揭露分子的大小、形状、对称性和聚集状态等。