辅助病毒依赖的腺病毒载体的生产和鉴定

实验分类：

其他实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

这一章详细地讲述了用于基因转染和基因治疗中的辅助病毒依赖性腺病毒载体(H D A d ) 的制备、扩增和大规模生产。在这一过程中，使用了适合悬浮培养的116生产细胞、 A d N G 163辅助病毒和于 p A 28E 4 骨架的辅助病毒依赖性病毒。到目前为止，本文讲述的改进方法和试剂是用于高通量、高质量生产H D A d 的最有效的方法和试剂。本文同时讲述了使用标准分子生物学技术来特征化H D A d 的物理滴度，辅助病毒的污染和基因组的结构。
作者：T.弗里德曼等,译者：殷勤伟等，本实验来自「基因转移」

来源：丁香实验

操作方法

营救、扩增、大规模生产辅助病毒依赖性载体

营救、扩增、大规模生产辅助病毒依赖性载体材料 CaCl2 (2. 5m o l /L ) 用 0.2um 滤膜过滤除菌，用密封锥形管分装， 4°C 保存。氯化铯梯度溶液（1.25 g / m l 和 1.35 g/m l ) 对于 I. 25 g/m l 和 I. 35 g/m l溶液，分别将 54. Og和 70. 4 g