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        微量样本多指标流式蛋白定量技术检测可溶性细胞因子

        相关实验:细胞因子检测

        最新修订时间:

        简介

        微量样本多指标流式蛋白定量技术(cytometric bead array,CBA)是一个基于流式细胞检测系统的多元分析方法,它融合了芯片技术的理念,能够对单一样品进行多个指标的蛋白定量检测。

        原理

        微量样本多指标流式蛋白定量方法的基本原理是对应待检系统中的每一个检测指标都设有不同的捕获微球,不同的捕获微球上包被有不同的特异捕获抗体,通过捕获微球与待测样品溶液混合,微球上的特异性捕获抗体就与样品(血清、血浆或细胞培养液)中的相应抗原或蛋白结合。


        最后,加入荧光的检测抗体以形成“三明治”夹心复合物。通过流式细胞仪进行荧光检测,根据不同波长的激发光激发而显示出不同的平均荧光强度,实现不同微球的二维定位,便可对样品中的各检测因子的含量进行分析。

        用途

        微量样本多指标流式蛋白定量技术涵盖了多种可溶性蛋白质的测量方法,目前公司推出的产品除了进行细胞因子检测外,还可以进行磷酸化的细胞信号蛋白等多种蛋白的定量分析。

        材料与仪器

        器材:流式管,流式仪,涡旋仪,移液器,离心机。


        试剂:


        ①稀释液;
        ②洗液;
        ③微球。

        步骤

        微量样本多指标流式蛋白定量技术的基本过程可分为如下几步:
        A. 按比例倍比稀释标准品,在相应的 10 个流式管中加入 50μl 稀释后的标准品,浓度如表 20-1。

        微量样本多指标流式蛋白定量技术检测可溶性细胞因子

        B. 在相应流式管加入 50μl 待测样品。
        C. 将混合的捕获抗体涡旋混匀,加入到有待测样品的流式管中,50μl/管,轻摇混匀。室温孵育 1 小时。
        D. 每管加入 50μl 混合的检测抗体,轻摇混匀,室温孵育 2 小时。
        E. 每管加入 1 ml 洗液,200 g 离心洗涤 5 分钟。
        F. 去掉上清,每管加入 300μl 洗液重悬微球。上机检测。

        来源:丁香实验

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