小鼠脾脏NK细胞分离试剂盒（阴选）

小鼠脾脏NK细胞分离试剂盒(阴选)产品描述 

Cat NO: IMP-MK018

NK 细胞是机体最重要的免疫细胞类型一，在小鼠脾脏中的含量在 3-5%左右，小鼠脾脏 NK 细胞 分离试剂盒可通过阴性分选法从小鼠脾脏中分离纯化出NK 细胞，纯化后可用于进一步进行培养扩增 或者直接进行 RT-qPCR 、Western blot 、流式细胞术等各种免疫学实验。

小鼠脾脏NK细胞分离试剂盒(阴选)适用范围

本试剂盒适用于分离小鼠脾脏中的 NK 细胞。

小鼠脾脏NK细胞分离试剂盒(阴选)运输和存储条件

2-8 ℃保存与运输，保质期为参考下表，所有组分开封后，有效期为 6 个月。

小鼠脾脏NK细胞分离试剂盒(阴选)组成信息

表 1. 试剂盒组成信息(10/20/50t)

产品名称                                                                            产品规格                     储存条件
NK 细胞分选抗体	20 μL	2-8°C 6  个月
	40 μL	2-8°C 6  个月
	100 μL	2-8°C 6  个月
链霉亲和素磁珠	200 μL	2-8°C 6  个月
	400 μL	2-8°C 6  个月
	1000 μL	2-8°C 6  个月

分离步骤

1.取新鲜小鼠脾脏一只，在 70 μm 细胞筛网上研磨脾脏，以预冷的 PBS 冲洗细胞筛网，收集细 胞悬液于 50 mL 离心管中，500 g ，离心 5 min(一个小鼠脾脏可取得 5-10×107 个脾脏细胞)。

2.离心结束，弃上清，加入 5 mL 红细胞裂解液，室温裂解 3-5 min ，再加入 20 mL PBS ，500 g， 离心 5 min(实际步骤建议参考使用的红细胞裂解液说明书)。

3.离心完成后，弃上清，将脾脏细胞重悬于 PBS ，细胞悬液用 70 μm 细胞筛网过滤后，计数，计 数完成后，将脾脏细胞悬液 500 g ，离心 5 min。

4.将细胞重悬于分选Buffer 中，调整细胞密度为 1×108 cells/mL(分选 Buffer 为含有 2 mM EDTA 和 1% BSA 的 PBS ，使用前需预先通过 0.22 μm 滤膜过滤除菌)。

5.取 100 uL 细胞悬液加入 2 μlNK 细胞分选抗体混合均匀，4 °C 孵育 15 min，期间每隔 5 min 轻 弹管壁使细胞与抗体混合均匀。

6.孵育完成后加入 1 mL 分选 Buffer 重悬，500 g，离心 5 min，弃去上清，加入 100 μL 的分选 Buffer 重悬。

7. 吸取 20 μl 链霉亲和素磁珠(吸取前涡旋振荡重悬磁珠，确保磁珠完全重悬，加入 1mL 分选 Buffer 进行重悬清洗磁珠，1000 g 离心 5 min 或在磁场中吸附，弃去上清，加入 20 μL 的分选 Buffer 重悬)。

8.将磁珠与细胞混匀，混匀后 4°C 孵育 10 min ，期间每隔 5 min 轻弹管壁使细胞和磁珠混合均匀 (此试剂盒说明书为分选 1×107 个脾脏细胞中的 NK 细胞的使用说明，如果分选更多的细胞，则可按比 例增加抗体、链霉亲和素磁珠的用量，少于 1×107 个细胞则将细胞悬液体积补至 100 μl ，加入 2 μl 抗 体和 20 μl 链霉亲和素磁珠)。

9.孵育完成后，加入2.5 ml 的 NK 细胞分选 Buffer 重悬，用移液器上下混合吹打 5 次混匀(避免 剧烈振荡或者上下颠倒混匀)，移入一个无菌流式管中。

10.将含有细胞的流式管置于磁力架上，静置 5 min ，待磁珠被吸附，细胞悬液变为清澈后将细胞 悬液吸入一个无菌离心管中(期间流式管在磁力架中)，此细胞悬液中即包含纯化的小鼠脾脏 NK 细 胞，500 g ，离心 5 min ，弃去上清，收集细胞。

注意事项

1.磁珠和抗体混合液使用和保存过程中均应避免冷冻、高速离心等操作。

2.操作过程应在无菌环境下进行，必须保证操作过程中使用的所有容器及所有直接接触细胞液的器

具严格无菌。

3.本产品需要与磁力架配套使用。

4.本产品仅供科研使用。