基于流式细胞术检测细胞凋亡
免疫学实验
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简介
流式细胞术是利用流式细胞仪（flow cytometer，FCM）对处于快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒进行多参数、快速、高度灵敏的定量分析和分选的技术。
目前，基于流式细胞术检测细胞凋亡的方法主要有4种：亚二倍体分析法、Annexin V／PI 双染法、线粒体膜电位检测法和 TUNEL 法。
原理
基于流式细胞术检测细胞凋亡的基本原理是几乎所有细胞凋亡的特征性形态、生化和分子特点均可以利用 FCM 的单参数和多参数分析进行检测；
如可检测凋亡细胞大小及密度的变化，通过荧光素标记凋亡细胞断裂的 DNA、外翻的磷脂酰丝氨酸以及凋亡相关蛋白等。
此外，正常活细胞及凋亡早期细胞的一个重要特点是细胞膜完整，而死亡细胞（坏死细胞和凋亡晚期细胞）的膜完整性丧失、膜通透性降低或丧失；
因此，利用一些荧光染料对细胞膜通透性选择性不同，对细胞进行荧光标记研究细胞膜的完整性和膜转运功能，如碘化丙锭（PI）可以染死亡细胞，Hoechst33258 及乙酰乙酸（FDA）可以染活细胞。
来源：丁香实验团队
操作方法
亚二倍体分析法是利用亚二倍体 DNA 染料与 DNA 结合，检测细胞内 DNA 含量的变化，常用的染料是碘化丙啶（propidium iodide，PI）。
Annexin V/PI 双染法检测细胞凋亡Annexin V/PI 双染法可以用于分析活细胞、凋亡细胞及坏死细胞。由于正常细胞不被染色，凋亡细胞可被标记上 Annexin V，坏死细胞和凋亡晚期细胞可被 PI 染色，因此利用流式细胞术可以将各群细胞明显地区分开来。
线粒体膜电位检测法检测细胞凋亡线粒体膜电位的下降时细胞凋亡早期的一个标志性事件，通过检测其变化观察细胞凋亡发生情况。
TUNEL 法检测细胞凋亡TUNEL 法习惯称为末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法（erminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labelling,TUNEL)。TUNEL 法比 DNA 缺口翻译标记法灵敏 10 倍以上。使用 TUNEL 系统具有很低的非特异性染色，凋亡细胞产生的信号强度至少比非凋亡细胞高 40 倍，测定凋亡细胞的灵敏度较测定死亡
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