细胞膜完整性及膜转运功能检测实验

1. 主要试剂的的配制碘化丙锭（PI）染色液（4℃ 避光保存）：Pl，100 μg/ml；TritonX-100，1.0%；NaCl 0.9%。2. 操作流程2.1 样本的准备2.1.1 培养细胞收集悬浮细胞于 Eppendorf 管中。贴壁细胞用胰蛋白酶消化后制成单细胞悬液，1000r/min离心 5 min。2.1.2 新鲜实体组织取材组织用 PBS 漂洗干净后，浸泡在含 PBS 的平皿或青霉

1. 主要试剂的配制碘化丙锭贮存液：100 μg/ml，4℃ 避光保存。Hoechst 33258 贮存液：100 μg/ml，4℃ 避光保存。2. 操作流程2.1 常规制备单细胞悬液（方法同 PI 染色法），加入 Hoechst 33258 溶液，使其终浓度为 1 μg/ml，37℃ 孵育 7 min，离心后弃染液，用PBS重悬。2.2 加入 PI 染液，使其终浓度为 5 μg/ml，置冰块上片

1. 主要试剂的配制FDA（Molecularprobes，In.OR，USA）保存液 1 mg/ml 的丙酮溶液。PI（Sigma，MO，USA）保存液 1 mg/ml 的水溶液。2. 操作流程2.1 常规收集细胞（1×106），悬浮于 1 ml 的Hank缓冲液（HBSS）中，加入 2 μl FDA 保存液，于 37℃ 孵育 15 min，加入 20 μl PI 保存液，室温下染色 5 min

1. 主要试剂的配制染色缓冲液：10 mmol/L HEPES-NaOH，pH7.4；140 mmol/L NaCl；2.5 mmol/LCaCl2。FITC-膜联蛋白 V 染色液：结合有FITC-膜联蛋白 V 按 1.0 mg/ml 溶于染色缓冲液中（新鲜配制）。PI（Sigma，MO，USA）保存液： 1 mg/ml的水溶液，于 4℃ 避光保存。2. 操作流程2.1 （0.1～1）×106 细