蛋白质分离和分析

基 本 方 案 可 溶 性 或 膜 结 合 抗 原 的 分 离 材 料 抗 体（Ab)-Sepharose (单兀 12. 2) 活 化 的（对照）Sepharose填料，用于制 备 A b -Sepharose填 料（单 元 12. 2)，但去除了抗体或偶联时用无关抗体替代 细胞或匀浆的组织 T S A 溶液，冰预冷 裂解缓冲液

基 本 方 案 1 用非变性去垢剂裂解细胞制成的悬液进行免疫沉淀 材 料 未标记或标记的细胞悬液 P B S ，冰预冷 非变性裂解缓冲液，冰预冷 5 0 % (V A O protein A-Sepharose 填 料（Sigma， Amersham Pharmacia Biotech)保存于含 0.1% (m /V ) B S A 和

基 本 方 案 1 考马斯亮蓝染色 检测范围为〇.3〜lMg 每蛋白质条带。 材 料（带 V 项 目 见 附 录 1) 聚丙烯酰胺凝胶（单 元 12. 3) 考马斯亮蓝、银染用固定液 考马斯亮蓝染液 甲醇/乙酸脱色液 7 % (V /V ) 水乙酸 Whatman 3M M 滤 纸（可选） 干 胶 仪（可选

基 本 方 案 1 液体容器中的蛋白质印迹 材 料 待分析样品 标准分子质量蛋白质，预 染 型（Sigma 或 Bio-Rad) 或 生 物 素 化 型（Vector labs 或Sigma) 转移缓冲液 无粉手套 Scotch-Brite 垫 片（3M ) 或类似海绵 Whatman 3M M 滤纸或类似物 转 移膜：0.45um 硝 酸 纤 维 素 膜（Mi