免疫学实验

乙酰胆碱受体分布于神经肌肉接头等处，蛇毒素可与之紧密结合，并连接过氧化物酶，通过化学反应可在电镜下观察到乙酰胆碱受体分布。来源：《免疫组织化学实验技术及应用》

凝集素（lectin）是一种无免疫原性糖蛋白，与糖的结合有一定专一性，如伴刀豆凝集素只与葡萄糖、甘露糖结合，麦胚凝集素只与 N-乙酰葡萄糖结合。并且，凝集素还可与标记物结合，如胶体金、辣根过氧化物酶等，因此可将作为检测糖基的一种简单而具有选择性的探针。不过由于糖类的复杂性以及凝集素特异的相对性，凝集素显示糖类细胞化学结果相对比较粗糙。细胞成熟过程中、肿瘤细胞或细胞发生损伤等情况下，凝集素分布情况都

由于高电子密度示踪剂很容易在细胞间隙扩散，并且如果细胞发生损伤，示踪剂还可进入到细胞中去，因此可利用此方法观察细胞连接及细胞损伤情况。常用的示踪剂有镧、过氧化物酶等。一般采用孵育法，即组织块在示踪液中孵育。也有人采用血管灌注法，但基底膜可阻止示踪剂进入细胞间隙或细胞内，因此一般只是在研究血管通透性改变时才用血管灌注法，大多数情况下用孵育法。来源：《免疫组织化学实验技术及应用》

细胞表面存在负电荷，文献称为 anionicsites、anionicgroups 或 negativecharges，国内有人称之为阴离子位点，因为它们在空间平面上呈点阵分布。此外，细胞的基膜上也存在阴离子位点，如血管内皮细胞基底膜，基膜的阴离子位点主要由硫酸肝素蛋白多糖构成，细胞膜与基底膜不同，其阴离子位点主要由唾液酸、某些蛋白的竣基等构成。关于其生物学作用，可能与细胞识别、通透性等有关系。病

离子细胞化学可用来显示细胞内离子定位分布，目前用得比较多的是显示细胞内钙的分布，通常需结合EDX能谱分析。细胞内钙离子分布是高度隔室化的，形成钙离子浓度不同的钙池，正常情况下，细胞内胞浆、线粒体、核等部位都有钙的分布；在大多病理情况下（如缺血、缺氧、中毒等），细胞内钙可升高，并且进入到细胞内的钙很多进入到线粒体内。细胞内钙离子细胞化学的原理是：首先用磷酸盐或草酸盐与钙离子反应，在原位形成沉淀，然后

免疫电镜标本取材后需要进行固定。内容来源《免疫组织化学实验技术及应用》

胶体金可用多种方法制备，其中应用较为广泛的是化学还原法。这一方法的基本原理是在氯化金水溶液中加入一定量的还原剂，使金离子还原为金原子，可用于制备胶体金的还原剂有 50 余种，但在生物医学领域内最为常用的还原剂是白磷、柠檬酸三钠以及鞣酸等，因此将重点介绍这三种还原剂制备胶体金分散颗粒的具体方法和步骤。内容来源《免疫组织化学实验技术及应用》

目前电镜能定位的酶主要有三类，它们是水解酶、氧化酶、转移酶。通过电镜酶细胞化学技术间接证明酶的存在，可定性研究细胞的标志酶，以及在正常和病理状态下酶的改变与疾病之关系。内容来源《免疫组织化学实验技术及应用》

区分活细胞和死亡细胞的关键在于死亡细胞膜转运功能及膜完整性的丧失。许多阳离子染料，如台盼蓝、碘化丙锭（PI）、溴化乙锭（EB）以及7-氨基放线菌素D（7-ADD）等，常被用于检测细胞的存活率。活细胞由于膜具有完整性而不被着色，死亡细胞（如坏死细胞或晚期凋亡细胞）由于其膜完整性的丧失而被着色。内容来源《免疫组织化学实验技术及应用》

钙质沉积于骨组织或病理变化的组织中，多见于组织坏死、动脉粥样硬化和肿瘤等钙化的组织。在茜素的作用下，可与钙形成有色的螯合物（钙质）成分。内容来源《免疫组织化学实验技术及应用》

肥大细胞来源于未分化的间质细胞，分布于血管周围黏膜下、疏松结缔组织、肿瘤组织及过敏性疾病等组织中，易被异染性染料着色。内容来源《免疫组织化学实验技术及应用》

核酸是细胞内的一种大分子化合物，核酸不仅存在于细胞核内，也存在于细胞质中，动物、植物和微生物等都含有核酸。核酸可分为核糖核酸（RNA）和脱氧核糖核酸（DNA）。经过染料和化学试剂，能够清楚地显示 DNA 和核仁组成区嗜银蛋白（AgNOR）物质。内容《免疫组织化学实验技术及应用》

病理的内源性沉着物是色素沉着物的一部分，组织细胞经过一定的病理变化，形成不同形状特点的沉着物质。这种聚合形成特殊的蛋白质，经过染色剂作用后，能够分别显示纤维蛋白和淀粉样物质。内容来源《免疫组织化学实验技术及应用》

病原微生物的种类繁多，包括属于真核微生物的真菌、厉于原核微生物的细菌（抗酸杆菌）、来自病毒的乙型肝炎表面抗原（HBsAg）等。这些物质的化学成分中，含有不同的黏多糖、酸性蛋白和脂蛋白成分。染色后，通过氧化剂或直接加热条件下，可使染色剂与物质结合而形成牢固的复合物。内容来源《免疫组织化学实验技术及应用》

在人体和动物体中含有不同种类的色素，人为色素是组织经过化学试剂的固定而形成的色素，如甲醛色素和铬沉积等。血源性色素有含铁血黄素、胆色素等，非血源性色素有黑色素和脂褐素等。它们在常规的切片中很相似，不易区别为何种色素，经过不同的染色方法，再进行鉴别，可判明色素的性质。内容来源《免疫组织化学实验技术及应用》

来源：《神经生物学实用实验技术》第四军医大学出版社

本实验介绍各种物理显影液和的配置方法。来源《免疫组织化学实验技术及应用》

组织芯片的制备是通过组织芯片制作仪细针打孔的方法。来源《免疫组织化学实验技术及应用》

SPA 可为多种示踪物（如荧光素、酶、胶体金、铁蛋白）所标记，应用较广泛的为酶标记 SPA 和金标记 SPA 技术。标记 SPA 常用的酶为 HRP，可应用于间接法染色，SPA 在 PAP 法中可代替桥抗体。内容来源《免疫组织化学实验技术及应用》

SPA 试剂的种类很多，主要有 SPA 菌体，包括荧光菌体和各种抗体标记的菌体；SPA 纯品标记的荧光素、同位素和酶标记试剂；用于亲和层析的 SPA-Sepharose CL-4B、6 MB 和 SPA-agarose，以及用于免疫电镜观察的 SPA-铁蛋白、胶体金和 SPA 标记的血蓝蛋白等。下面分别介绍几种常用的 SPA 标记试剂的制备方法。内容来源于《免疫组织化学实验技术及应用》