免疫学实验

树突状细胞（dendritic cell，DC）在体内数量极少（它在脾脏贴壁细胞中所占的比例小于 1％），从体内分离 DC 耗时而且细胞产量很低，大大延缓了对 DC 的研究。因此，从前体细胞诱导培养大量的 DC 方法的建立，对于研究 DC 的生物学功能具有重要的意义。

B细胞在受到特异性和非特异性抗原等的刺激后，可诱导B细胞发生活化和增殖。检测B细胞的增殖情况在一定程度上反映了B细胞的功能状态，其检测方法简便、可靠，主要有3H-胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）及5-溴脱氧嘧啶核苷（Brdu）掺入法以及2-羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯（5，6-carboxy-fluorescein diacetate succinimidyl ester, CFSE）染色法等。

巨噬细胞（macrophages，MΦ）是由血液中单核细胞迁入组织后分化形成的成熟类细胞，广泛分布于脾脏、肝脏、腹腔、神经系统以及结缔组织等，具有吞噬杀伤、抗原提呈及免疫调节作用。近年的研究发现巨噬细胞在不同微环境中可以发生不同性质的活化，成为具有不同表面分子和功能特征的亚群。根据其不同的表型特点和功能特点及对 Th1／Th2 应答的诱导，通常将其分为两种类型：经典活化的巨噬细胞（classica

在免疫应答的过程中，B 细胞接受不同抗原刺激后，可转换表达不同的重链恒定区基因，改变所产生的免疫球蛋白分子（immunoglobulin，Ig）的类型。LPS 可刺激鼠脾 B 细胞发生 IgG2b 和 IgG3 的类别转换。细胞因子能诱导 Ig 向特定的类别发生转换，如 IL-4 和 LPS 共同活化 B 细胞可诱导鼠发生 IgG1 和 IgE 的类别转换，人发生 IgG4 和 IgE 的类别转换

免疫磁珠分选（magnetic cell sorting）细胞是一种高效简便的免疫细胞分离和纯化方法，目前已广泛应用于各种细胞分选，如造血干细胞等的分离和纯化。该法通过免疫细胞表面的抗原与连接着磁珠的特异性抗体相结合，在外加磁场中，与免疫磁珠相结合的免疫细胞被吸附于磁场中，使这些细胞与其他不能结合磁珠的细胞分离。免疫磁珠法分为正选法和负选法：如果磁珠结合的细胞是所要分离获得的细胞，即为正选法；如果

免疫标记技术包括放射性标记以及非放射性标记技术，放射性标记技术是利用放射性同位素示踪物标记抗原、抗体或配体等，用来检测相应的抗原、抗体等微量物质的一种分析技术。通常使用的放射性同位素标记物有 125l 以及 3 H，125l 主要用于标记蛋白类物质，如抗体，而 3 H 常用于小分子物质标记，如甾体激素、腺苷。该技术因具有灵敏度高、特异性强等优点而广泛用于微量物质以及半抗原，如神经肽、激素等的定量检

作为天然免疫细胞的重要组成部分，中性粒细胞的作用在炎症发生的过程中发挥着重要作用。要探讨其机制，常需分离小鼠腹腔以及外周血中性粒细胞和人外周血中性粒细胞进行研究。但是，若未经诱导，从一只小鼠腹腔内能分离到的中性粒细胞少于106，因此，若需要制备大量中性粒细胞，则需要进行诱导。目前，诱导分离中性粒细胞的方法有 Percoll 密度梯度分离法和蔗聚糖-泛影葡胺密度梯度离心法等。

抗体亲和力是指抗体与抗原或半抗原结合的牢固程度。亲和力一般以亲和常数 K 表示，K 的单位是 L/mol，通常 K 的数值范围在 10-101°L/mol，也有的可高达 104L/mol。在 McAb 特性鉴定中，亲和力的测定也是十分重要的，它可为正确选择不同用途的 McAb 提供依据。如在免疫学测定及建立各种检测方法时，应选用亲和力高的 McAb，以提高检测方法的敏感性和特异性，并可节省试剂；但

基于生物化学检测细胞凋亡是依据细胞凋亡生物化学特征检测细胞凋亡的方法。目前，基于生物化学检测细胞凋亡的方法主要有 2 种：琼脂糖凝胶电泳法和 ELISA 法。

抗体纯化实验是用于纯化免疫血清中的抗体。目前，用于抗体纯化的方法主要有 6 种：盐析法、凝胶过滤、离子交换层析、亲和层析和高效液相色谱。

动物采血实验是用于收集免疫动物血清的方法。目前，用于动物采血的方法主要有 3 种：小鼠割（剪）尾采血法、小鼠眼眶静脉丛采血法和兔颈动脉放血法。

基于形态学检测细胞凋亡是根据凋亡细胞的形态、结构与功能的改变，建立了许多种检测细胞凋亡的方法。目前，基于形态学检测细胞凋亡是根据凋亡细胞的方法主要有 3 种：直接观察法、苏木精-伊红染色法和 Hoechst 33258 染色法。

流式细胞术是利用流式细胞仪（flow cytometer，FCM）对处于快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒进行多参数、快速、高度灵敏的定量分析和分选的技术。目前，基于流式细胞术检测细胞凋亡的方法主要有4种：亚二倍体分析法、Annexin V／PI 双染法、线粒体膜电位检测法和 TUNEL 法。

B 细胞在特异性抗原、抗 Ig 抗体和（或）促有丝分裂原等的激活后，可发生活化、增殖。

外周成熟 B 细胞可以分为多个亚群.传统上根据表型、组织学定位和功能特点的不同将 B 细胞分为 CD5+的 B1 细胞和 CD5 的 B2 细胞两个亚群。B细胞主要功能是分泌抗体参与体液免疫。在一定情况下，B 细胞也可以分泌细胞因子，发挥免疫学调节作用，并根据分泌细胞因子的不同将 B 细胞分为不同效应功能的亚群，调节性 B 细胞通过产生负性调控因子 IL-10 发挥作用。

抗癌药物对DNA拓扑异构酶活性的影响实验是用琼脂糖凝胶电泳法来测定抗癌药对I和II型拓扑异构酶的作用。许多抗癌药物是以DNA拓扑异构酶为靶点使之形成可断裂的DNA蛋白复合物从而引起DNA损伤。

从单细胞水平观察分泌蛋白的表达已成为目前研究细胞功能的重要内容，酶联免疫斑点法(ELISpot)技术巧妙地运用了酶联免疫吸附技术，从方法上解决了该难题，已广泛运用于各项重要课题研究中。ELISpot最初用于检测分泌抗原特异性抗体的个体B细胞，以后该方法不断改进，用于检测分泌特定抗原的单个细胞。

IgG的分离与提纯实验可以用于：制备酶标抗体或荧光抗体。

本实验描述了将磷酸肽链/非磷酸肽链和磷酸酪氨酸交联到 Affi-Gel 10 亲和介质上以利用亲和柱层析法纯化抗体的方法。来源《精编分子生物学实验指南（第五版）》

来源：《精编分子生物学实验指南》第五版