酶联免疫斑点实验 (ELIspot)

一、包被96孔板 用70％乙醇浸润96孔板中的PVDF膜30 s 加入捕获抗体（PBS稀释），4℃过夜 倒空板中包被液，轻轻在纸上拍干，用PBS洗涤，禁用洗板机 加入100ul 2%的脱脂奶粉（或者BSA）室温孵育2小时，封闭板中空白位点 PBS洗涤1次。（如果暂时不用，可将96孔板干燥后4保存，可保存2周以上） 二、细胞刺激和细胞因子捕获

一、ELISPOT包被 1. 设计好实验，把每个孔要加入的内容做成卡片，到时候就会从容很多。 2. 每孔加入15 μL 70%的乙醇预湿30秒。 3. 加入100 μL去离子水洗涤三次，尽量减少乙醇的残留。 4. 按照试剂盒的使用说明，将包被抗体储存液稀释在PBS缓冲液中，每孔加入50 μL，4°C包被过夜。 5. （次日）倾倒包被液，用PBS洗涤5次，

一、试剂盒内容 PVDF96孔板，室温保存；0.1 ml捕获抗体，4℃保存；0.1 ml生物素标记检测抗体，4℃保存；15 ul亲和素碱性磷酸酶标，4℃保存；0.25 g牛血清白蛋白，4℃保存；0.25 g脱脂乳，4℃保存；11 ml底物缓冲液，4℃保存；11 ml浓缩PBS（10X），室温保存；11 ml浓缩洗涤液（200x），室温保存。 二、试剂的准备 1. 10 m