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        Strep 标签蛋白纯化 protocol

        相关实验:免疫球蛋白纯化技术

        最新修订时间:

        简介

        Strep-tag® 技术来源于德国 IBA Lifesciences 公司。利用 Strep-tag® 技术,可纯化得到高纯度的 Strep 标签蛋白,杆状病毒、哺乳动物细胞、酵母和细菌表达系统皆可使用。耐受不同的缓冲条件和添加剂(高盐、洗涤剂、还原剂、金属离子和螯合剂)。标签与配体间高达 pM 级的亲和力使得其不仅用于重组蛋白的纯化,更适用于蛋白质-蛋白质相互作用分析。

        原理

        Strep 标签纯化蛋白质的技术原理,是利用自然界中最强的非共价作用之一:生物素(biotin)和链霉亲和素(streptavidin)之间的相互作用。将链霉亲和素改进后,就得到了非常稳定的 Strep-Tactin®。Strep-Tactin® 同样也是一种蛋白质,能高效且可逆的结合短肽标签 Strep-tag®,而且保留了结合生物素的能力。生物素加入后,会作为特异性的竞争剂,洗脱 Strep 标签蛋白。

        用途

        1. 高达pM 范围的亲和力(KD up to 6.2 x 10-11 M);
        2. 纯化树脂材质稳定;
        3. 小标签(8~28 aa)无需移除,不影响蛋白折叠和功能;
        4. 极高的蛋白纯度(纯度> 95%);
        5. 应用于多种目标蛋白检测系统:Western blot,ELISA,免疫荧光,FACS等;
        6. 兼容多种缓冲条件:高盐,洗涤剂,金属离子,螯合剂,还原剂;
        7. 适用于多种蛋白的纯化,如膜蛋白、金属蛋白,低丰度蛋白等;
        8. Twin-Strep-tag®标签蛋白固定在界面上时(SPR,BLI)蛋白不易脱落。

        材料与仪器

        Strep 标签纯化系统包含两个标签,8 个氨基酸链 Strep-tag®II(氨基酸序列:WSHPQFEK)和 Twin-Strep-tag®(氨基酸序列:WSHPQFEK-GGGSGGGSGG-SA-WSHPQFEK),

        一般来说,这两个标签都不会干扰目标蛋白的折叠或生物活性,也不与重金属离子缓冲杂质反应,不具有离子交换性质不诱导蛋白质聚集。因此,蛋白纯化时可不必除去 Strep 标签。

        Strep 标签蛋白纯化 protocol

        图 1

        配体介绍

        搭配 Strep 标签进行蛋白纯化的配体有 2 种:Strep-Tactin® 和 Strep-Tactin® XT,都可以结合 2 种 Strep 标签(注:Strep-tag® II 也能与 Strep-Tactin® XT 结合)。

        Strep 标签蛋白纯化 protocol

        图 2

        Strep-Tactin® 和 Strep-Tactin® XT 均是优化过的链霉亲和素,为四聚体形式。每个单体的分子量为 13 kDa。总分子量为 52 kDa。标签 Twin-Strep-tag® 和配体 Strep-Tactin® XT 的结合亲和力高达 pM,非常适合于在 ELISA 或 SPR 等分析应用中对蛋白质进行固定和检测。

        步骤

        实验步骤之一:Strep-Tactin®

        Strep 标签蛋白纯化 protocol

        实验步骤之二:Strep-Tactin® XT

        Strep 标签蛋白纯化 protocol

         

        来源:丁香实验

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