蛋白质实验

本实验介绍关于胰岛素受体与[125I]胰岛素的交联过程。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

在这里，我们以配体与 Affi-Gel10 的偶联为例介绍本操作程序。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

在本实验中，我们用胰岛素琼脂糖柱层析作为胰岛素受体纯化的最后一步。这一方法利用了胰岛素受体对胰岛累的高亲和性结合能力（KD=10-9mol/L)。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

本实验介绍关于溶解受体的凝集素亲和层析过程。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

虽然 TriumX-100 是从鼠肝质膜溶解胰岛素受体的一种良好的去垢剂，但它未必适合其他膜蛋白的溶解。这里，介绍一种筛选去垢剂的策略以确定它是否适于溶解某一待分离的膜蛋白。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

本实验介绍关于胰岛素受体的溶解及活性测定过程。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

胰岛素可高亲和性地与其受体结合（KD~109mol/L)，这一能力使我们能估测出甚至是相当粗制的制备物中的胰岛素受体数。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

习惯上，蛋白质的浓度通常是按 Lowry 及其合作者（Lowry 等，1951) 的方法用 Folin-Ciocalteau 试剂进行测定的。但样品中的盐或去垢剂等对这种方法有干扰。Peterson(1977) 介绍了一种改进方法，可部分地解决这些问题。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

Neville(1968) 所述的方法对分离鼠肝质膜的效果较好，但对分离其他组织的质膜不一定适用。这里，介绍一种从其他组织制备粗制质膜组分的方法。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

本实验介绍分离肝脏质膜的 Neville 法。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

本节的目的是，为如何用一系列类似于本单元所述的实验来快速获得一种新的在细菌中过表达之蛋白质的初步纯化方案，提供一组简略的工作程序。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

本实验介绍蛋白质与免疫亲和介质结合需要多少时间。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

本实验介绍沉淀 σ32 和 RNA 聚合酶需聚乙烯亚胺的含量。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

本实验介绍溶解包涵体沉淀需N-十二烷基肌氨酸钠的含量。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

在常规的蛋白质斑点印迹试验中，印迹膜封闭 1 小时后，与一抗反应 1 小时，再与二抗反应 1 小时。在允许灵敏度较低的情况下，封闭、一抗、二抗等几步可结合进行, 这样可加快速度，花不到 15 分钟即可。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

当蛋白质在保持其天然构型不变的条件下进行电泳时，其迁移率可以作为它的均一性的一种量度。由于迁移率是电荷和形状两者的函数，因此可以预期，能将单体、二聚体等形式彼此分开。也有可能因异构体形状的差异而用非变性凝胶电泳把蛋白质的构象异构体（conformational isomer) 分开。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

由于蛋白质在 SDS 凝胶上可得到高分辨分离，并可用考马斯亮蓝（CBB) 给予灵敏的染色，故按本单元实验 4 所述的方法，对经 SDS 凝胶分离的蛋白质制备物进行染色和脱色后扫描，可得到蛋白质样品的纯度。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

在本单元中，用一种较简单的方法测定它对核心 RNA 聚合酶自非特异性模板 poly(dAT) 起始转录的刺激作用。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

蛋白质印迹法，它是用免疫学方法来测量某一蛋白质的量。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。

极需一种定量测定样品中蛋白质浓度的快速而准确的方法，以使人们能在纯化过程中跟踪蛋白质的回收。虽然至今还没有一种理想的方法，但 Bradford(1976) 法目前用得非常普遍。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。