用新 RACE 法扩増 cDNA 的 5'末端

PCR 技术

最新修订时间：2022-02-10

简介

这一实验方案分为 6 个阶段。第 1 阶段：降解 RNA 的去磷酸化; 第 2 阶段：完整 RNA 去帽; 第 3 阶段：RNA 寡核苷酸的制备; 第 4 阶段：RNA 寡核苷酸与细胞 RNA 的连接; 第 5 阶段：反转录; 第 6 阶段：扩增。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。

来源：丁香实验

操作方法

用新 RACE 法扩増 cDNA 的 5'末端

第 1 阶段：降解 RNA 的去磷酸化一、材料 1. 缓冲液、溶液和试剂乙酸钠，3mol/L,pH5.2 乙醇二硫苏糖醇（DTT)（0.1mol/L) 苯酚/氯仿（1:1，体积比） 2. 酶和酶缓冲液磷酸酶缓冲液，10X 蛋白酶 K RNasin 牛小肠碱性磷酸酶（CIP) 3. 核酸和寡核苷酸 RNA 样品 4. 特殊设备预设为 37°C、50°C 的水浴