PCR 技术

PCR 因具有较高的特异性和可靠性，被广泛应用于遗传检测、亲子鉴定、血液筛査、临床 诊断中，除此之外，PCR 技术也是分子生物学研究领域中非常有用的工具。但是 PCR 技术也有 一些固有的缺陷，主要表现在 PCR 实验中总是不可避免会出现一些非特异性扩增的产物。为了克服这个缺点，目前研究者多采用热启动 PCR （hot start PCR）来降低这些非特异性产 物的扩增。热启动 PCR 是一种改良

常规 PCR 反应可以扩增到 3〜4 kb 的 DNA 片段，而超过 5 kb 的 DNA 片段就已经很难扩增出来了。虽然有人可以扩增出 5〜15 kb 的 DNA 片段，但产量很低。造成常规 PCR 扩增长片段 DNA 效果不好的原因有以下几点：① 常规 PCR 反应中应用的耐热 DNA 聚合酶（如酶）缺乏 3'→5' 核酸外切酶活性，不具备很好的校读功能，因而具有较高频率的错误碱基的掺入，不能

高（G + C）含量 DNA 序列在生物基因组中广泛存在，有的高（G + C）DNA 片段占基因组中的一小部分，有的在基因组中几乎平均分布，在基因组 DNA 中局部片段（G + C）含量甚至可高达 80% 以上。由于 GC 碱基间可形成三个氢键，高（G + C）含量 DNA 单链或双链易形成复杂的二级结构和三级结构，所以，以高（G + C）含量 DNA 作模板，特别是以高（G + C）量基因组 D

PCR 芯片是在硅片或玻璃片等基片材料上加工生成一系列的微管道、微反应室等空间结构，并整合微阀、微加热器、微感应器等控制结构，利用芯片集成度高和比表面积大的特性，实现芯片上的快速 PCR 扩增。

致突变 PCR，是基于 PCR 技术在 DNA 序列中引入碱基突变或序列的插入和缺失的方法。致突变 PCR 可分为 2 种类型：构建突变体库的随机错掺 PCR 和定点突变 PCR，其中构建定点突变序列的方法主要包括重叠延伸 PCR 构建定点突变序列、大引物 PCR 构建定点突变序列、重组 PCR 构建定点突变序列和环状质粒 PCR 构建定点突变序列四种类型。

常规的 PCR 扩增需要进行细菌培养、质粒制备等多步操作后才能进行基因扩增，操作繁琐， 耗时较长，同时在反复的操作中 DNA 量损失也较大，产率较低。在 1989 年 Gussow Clackson 建立了菌落 PCR (colony PCR) 法，菌落 PCR 与我们通常的普通 DNA 的 PCR 的不同在于，直 接以单个菌作为模板。是一种可以快速鉴定菌落是否为含目的质粒的阳性菌落，操作简单、快

融合 PCR 是通过 PCR 的方法，将两段 DNA 序列连接到一起，处于相邻位置。一般来说, 融合 PCR 设计的引物序列的 5』端和 3'端各包含一段待融合的模板序列，这条引物相当于衔接头，将两段 DNA 序列连接到一起。融合 PCR 技术最常用于全长序列的拼接，现在随着技术的发展，逐步应用于基因的破坏、基因的标记、序列缺失、两种基因的融合等领域。

当今，PCR 技术已成为分子生物学领域一种有力的研究工具，应用于现代分子生物学各个方面。人们发明各种各样 PCR 方法来克隆基因，因而在基因克隆和载体构建上，PCR 技术得到广泛的应用，并业已成为传统重组基因技术的一种必要的补充手段。常规的克隆和重组 DNA 技术需要用限制酶对 DNA 片段进行消化和用连接酶将两个片段连接起来。但有时待克隆的基因没有合适的限制酶切位点，不能用常规的重组 DNA 技

PCR 在动物学中的应用利用聚合酶链反应 (polymerase chain reaction, PCR) 技术，在分子水平上认识动物、了解动物和利用动物，从而进一步推动动物学研究进展。目前 PCR 在动物学中的应用方法主要有 4 种：微卫星 PCR 在动物分类和进化中的应用、巢式 PCR 在动物疾病诊断中的应用、T 接头介导 PCR 在转基因动物外源基因定位中的应用、环介导等温扩增技术在动物学中

实时定量 PCR( qPCR ) 于 1996 年由美国 Applied Biosystems 公司首先推出。传统 PCR 方法可对特定 DNA 片段进行指数级的扩增，并可以通过凝胶电泳的方法对扩增产物进行定性分析，也可以通过放射性核素掺入标记后的光密度扫描来进行定量分析。无论定性还是定量分析，都属于对 PCR 反应终产物的检测。但很多情况下我们更需要确定的是未经 PCR 信号放大之前的起始模板量

PCR 是指在 DNA 聚合酶催化下，以亲代 DNA 为模板，以特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸三步骤循环，在体外复制出与模板 DNA 序列互补的子链 DNA 的过程，能快速特异地在体外扩增任何目的 DNA 片段。定性、半定量和定量 PCR 技术在生物学和医学中的应用极其广泛，目前，定性 PCR 的方法主要有原位 PCR 和反向 PCR 等。

PCR 是指在 DNA 聚合酶催化下，以亲代 DNA 为模板，以特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸三步骤循环，在体外复制出与模板 DNA 序列互补的子链 DNA 的过程，能快速特异地在体外扩增任何目的 DNA 片段。定性、半定量和定量 PCR 技术在生物学和医学中的应用极其广泛，目前，半定量 PCR 的方法主要有 RT-PCR 等。

实时荧光定量PCR可应用于： （1）定量分析未知模板；（2）单个或多个基因表达谱分析。

差示反转录PCR也称为mRNA差异显示技术，它是将mRNA反转录技术与PCR技术二者相互结合发展起来的一种RNA指纹图谱技术，具有简便、灵敏、RNA用量少、效率高、可同时检测两种或两种以上经不同处理或处于不同发育阶段的样品，该方法自问世以来已被广泛用于差异表达基因的克隆鉴定研究中。

本实验主要用于在体外快速扩增特定基因或DNA序列。

聚合酶链式反应简称PCR（英文全称：Polymerase Chain Reaction）（又称：多聚酶链式反应），聚合酶链式反应，是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，由高温变性、低温退火（复性）及适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。

降落PCR（touchdown PCR），一种PCR技术，主要用于PCR的条件的优化。

菌落PCR可用于：（1）重组体的筛选；（2）重组体DNA测序分析。

重叠延伸PCR技术主要用于获得其它依靠限制性内切酶消化方法难以得到的产物。可用于：（1）基因的定点突变；（2）融合基因的构建；（3）长片段基因的合成；（4）基因敲除以及目的基因的扩增。

免疫PCR (Immuno PCR, Im-PCR) 是利用抗原抗体反应的特异性和PCR扩增反应的极高灵敏性而建立的一种微量抗原检测技术。是用一段已知DNA分子标记抗体作为探针，用此探针与待测抗原反应，PCR扩增粘附在抗原抗体复合物上的这段DNA分子，电泳定性，根据特异性PCR产物的有无，来判断待测抗原是否存在。