差减 cDNA 文库的建立实验

实验分类：

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

差减文库包含了存在于一种细胞或组织而不存在于另一种细胞或组织的 mRNA cDNA 克隆。这个 cDNA 文库被用来分离相应于一类 mRNA 的一组 cDNA 克隆，或用于分离一个特定mRNA 的 cDNA 克隆。这中间筛选 cDNA 克隆的过程是很费劳力的。

来源：《精编分子生物学实验指南（第五版）》

来源：丁香实验

操作方法

基本方案

实验所需「材料」、「试剂」、「耗材」具体见「其他」1. 从［+］和［-］的细胞或组织获得 cDNA 文库。本方案假设［＋］和［-］文库是 λ 噬菌体文库。如果这两种文库的载体都是质粒的话，那么它们都只需要 100 ug。插入片段需琼脂糖凝胶电泳纯化，而不仅仅是蔗糖梯度离心纯化。2. 使用大规模的 DNA 纯化柱从［＋］和［-］文库中各纯化＞1 mg 的 DNA。以 1 mg/ml