用随机寡核苷酸延伸法进行扣除 cDNA 探针的放射性标记

实验分类：

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

此方案中 cDNA 的合成是在 4 种饱和浓度的 dNTP 及一种痕量的放射性标记的 dNTP 中进行的。扣除杂交后，在大肠杆菌 DNA 聚合酶Ⅰ的 Klenow 片段作用下，富集的单链 cDNA 通过随机寡核苷酸引物延伸的二次合成反应，标记成高比活性的探针。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

来源：丁香实验

操作方法

用随机寡核苷酸延伸法进行扣除cDNA探针的放射性标记

一、材料 1. 缓冲液和溶液二硫基苏糖醇（DTT) (1 mol/L） EDTA ( 0.5 mol/L，pH 8.0) 乙醇 HCl ( 2.5 mol/L) NaOH ( 3 mol/L) 酚：氯仿（1:1，V/V) 胎盘 RNA 酶抑制剂 5X 随机引物缓冲液（250 mmol/L Tris ( pH 8.0)，25 mmol/L MgCl2，100 mmol/L NaC