大量培养物中分离 BAC DNA

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

BAC 重组子的精细分析，包括详细的限制酶切图谱、DNA 测序或亚克隆，所需 DNA 量都超过小量制备所能提供的量。本方案的制备流程适用于重组 BAC 的大规模培养物。500 ml BAC 转化菌的平均产量为 20~25 μg BAC DNA。还可用柱层析对 DNA 产物进一步纯化。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

来源：丁香实验

操作方法

大量培养物中分离 BAC DNA

一、材料 1. 缓冲液和溶液乙醇异丙醇酚: 氯仿（1:1, V/V) DNA 提取液碱性裂解液Ⅰ，预冷碱性裂解液Ⅱ 碱性裂解液Ⅲ，预冷 STE 溶液，预冷 TE ( pH 8.0) 2. 酶和缓冲液溶菌酶限制性内切核酸酶 3. 核苷酸与寡核苷酸脉冲场凝胶电泳的 DNA 标准参照物 4. 凝胶脉冲场凝胶电泳仪 5. 培养基含 12.5 μg/