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- 2025年07月15日
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Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与或标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。关于Western Blot技术，我们实验室凭着几年来的丰富经验，总结出以下几点建议：1.抗体的选择 对于国内的大多数实验
相关专题 Western是利用抗体检测蛋白常用的方法，本手册旨在表明Western-blot的技术原理、操作步骤及常见问题分析，可采用以下步骤进行Western-blot实验： Western-blot技术原理： Western Blot技术是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳后，经PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体
成纤维细胞生长因子）、EGF（表皮生长因子）均购自Gibco公司 。抗体为:Nestin兔抗鼠多克隆抗体（博士德公司），GFAP单克隆抗体（Sigma公司），β-Ⅲ tubulin 单克隆抗体（Sigma公司），生物素标记山羊抗小鼠IgG（北京中杉生物试剂公司），山羊抗兔Cy3-IgG（博士德公司），DAB（北京中杉生物试剂公司） ，胎牛血清（FBS，杭州四季青生物试剂公司）。仪器：CO2培养箱（Thermo，美国） ，荧光倒置相差显微镜（Olympus IX70，日本）。病毒载体：Ad/EGFP，滴度为2×1011
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