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Western快速转膜液(10
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100ml
碧云天生产的Western快速转膜液(10X),即Western Rapid Transfer Buffer (10X),是一种10倍浓缩的安全无毒害的用于Western时湿法快速转膜的缓冲液。
本产品安全无毒害。本产品为10倍浓缩(10X)溶液,使用前需要用适当水和乙醇稀释至1X。本产品不含有毒有害组分,也无需使用剧毒的甲醇等试剂。
本产品转膜快速。使用本快速转膜液时,在500mA恒流转膜15-20分钟(推荐使用外置冰浴)或400mA恒流转膜约20-25分钟(可以不使用外置冰浴,仅使用内置冰盒即可)即可将PAGE凝胶上的蛋白转移至PVDF膜或硝酸纤维素膜(NC膜)等印迹膜上,并且产热少,转膜效果好。相同的条件下使用传统的转膜液更容易导致过度发热,而在发热程度相似的情况下传统转膜液需要转膜更长时间。
本快速转膜液的转膜效果与传统转膜液一致或略优。本快速转膜液与传统转膜液在转膜前后的效果比较请参考图1。图中可见400mA 25min可以把270kD的蛋白分子量标准完全转膜。如果所检测的目的蛋白分子量不是很大,可以酌情把转膜时间缩短为20或15min,也可以考虑使用外置冰浴500mA转15-20min。
图1.Western快速转膜液与传统转膜液在转膜前后的对比效果图。上图为使用本快速转膜液的效果图,下图为使用传统转膜液的效果图,转移电极芯组件中放置两个转移三明治夹进行转膜,仅用内置冰盒进行降温。凝胶为BeyoGel™ Plus PAGE预制胶(Hepes, 4-20%, 15孔) (P0524),凝胶厚度为1.5mm;蛋白分子量标准分别为彩色预染蛋白质分子量标准(10-180kD) (P0068/P0069)和BeyoColor™彩色预染蛋白分子量标准(6.5-270kD) (P0071/P0072),上样量为6μl;传统的转膜液为Western转膜液(P0021A/B);PVDF膜为PVDF膜(进口分装, 6.6×8.5cm, 0.45μm) (FFP33);转膜设备为MiniBlot™蛋白转膜系统(E6050);转膜电源为BeyoPower™高电流电源(300V/2000mA/200W) (E6085)。实际转膜效果会因实验条件、仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。
本快速转膜液的Western检测效果与传统转膜液基本一致。本快速转膜液与传统转膜液对于大分子量目的蛋白(ZO-1、β-Catenin)和小分子量目的蛋白(GAPDH、Histone H3)的Western检测效果比较请参考图2。
图2.Western快速转膜液与传统转膜液对于不同分子量目的蛋白的Western检测效果比较图。左图为使用本快速转膜液的Western检测效果图,右图为使用传统转膜液的Western检测效果图。蛋白样品为HEK293T细胞裂解液,上样量分别为30、20、10和5ng;抗体分别为ZO-1 Rabbit Polyclonal Antibody (AF0321)、β-Catenin Mouse Monoclonal Antibody (AF0069)、GAPDH抗体(小鼠单抗) (AG019)、Histone H3 Mouse Monoclonal Antibody (AF0009)。其它电泳和转膜条件和图1中完全相同。实际Western效果会因实验条件、仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。
本快速转膜液产热显著低于传统转膜液,400mA恒流转膜时外槽无须冰浴,仅用转膜槽中的内置冰盒,就可以确保不会产生过热现象。如果希望更快速地完成转膜,可以使用500mA恒流转膜,此时推荐使用外置的冰浴。
本快速转膜液使用便捷,无需调节pH值。
本产品适合手工配制的Tris-Gly和Hepes等缓冲系统的SDS-PAGE凝胶的转膜,也适合Tris-Gly、Hepes和Bis-Tris系统等预制胶的转膜。
使用后转膜液可以回收,回收后可以再使用1-2次。
4℃保存,一年有效。室温保存,至少一周内有效。
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