碧云天的Gel-Green Plus (增强版凝胶绿)核酸染料是一种Gel-Green、EB (Ethidium bromide,溴化乙锭)的升级换代产品,用于凝胶中DNA、RNA等核酸的染色。Gel-Green具有安全(未检测到致突变性和细胞毒性)、灵敏度高、稳定性好等优点,凝胶中的核酸在使用本产品后经约500nm波长蓝光(也可以使用约260nm紫外光,但紫外成像条带相对较暗)激发呈现绿色荧光,适用于原先使用SYBR Green或SYBR Gold为核酸染料的凝胶成像和检测系统。Gel-Green Plus是Gel-Green的增强版,相对于Gel-Green,使用方法完全一致,但条带更清晰、更均匀、背景更低,大大降低条带的拖尾和弯曲,而且对条带迁移几乎没有影响,即使上样量很高,也可获得良好的条带分离效果。
由于Gel-Green Plus在500nm左右处有最大的激发波长,可以使用对人体无害的蓝光灯或蓝光成像仪进行核酸检测,从而避免常规的紫外检测对核酸样品的致突变性,以及紫外对人的眼睛和皮肤的伤害。特别在切胶回收时,使用Gel-Green Plus并用蓝光灯具有很大的优势,不仅可以避免核酸样品的突变,也可以避免紫外光对人体的伤害。
Gel-Green Plus比EB或SYBR Green更安全。Gel-Green Plus在远高于其工作浓度范围时均没有细胞毒性及诱变性。微型艾姆斯氏试验(Mini-Ames test)结果表明,即使在S9代谢活化时,也没有检测到致突变性。Gel-Green Plus、Gel-Green和碧云天另外一种安全型核酸染料Gel-Red,由于它们特殊的化学结构使其难以进入细胞,从而大大降低甚至避免了染料的致突变性和细胞毒性。而SYBR Green染料可以穿透细胞膜,进入活细胞并染色DNA。并且有报道SYBR Green可以强烈增强紫外线诱导的基因突变。
Gel-Green Plus检测灵敏度高,对于小分子量核酸的染色效果好。Gel-Green Plus最低可检测1ng的DNA样品,在检测低浓度、微量DNA或RNA方面比EB更佳,尤其对小分子量的DNA检测非常灵敏。在使用浸泡染色法时,Gel-Green Plus和SYBR Gold的灵敏度相近甚至更高;与SYBR Gold不同的是,Gel-Green Plus预先配制在凝胶中也有很高的灵敏度。EB对于小分子量核酸染色效果差,而Gel-Green Plus对于小分子量核酸的染色效果很好,便于观察酶切或PCR获得的小分子量核酸片段。本说明书推荐使用的Gel-Green Plus浓度,其检测效果略优于EB。如果希望获得更高的染色灵敏度,可以适当提高Gel-Green Plus的工作浓度。
Gel-Green Plus的稳定性好,染色重复性高。含SYBR Green的凝胶核酸染色的重复性比较差,这通常是由于SYBR系列染料的稳定性差导致的。而Gel-Green Plus的稳定性很好,可以室温长时间保存及使用微波炉加热。Gel-Green Plus的光稳定性良好,可以在室内正常光线下操作而无需避光。由于其热稳定性和光稳定性,含Gel-Green Plus的凝胶在核酸染色时的重复性非常好。
Gel-Green Plus可以使用和Gel-Green、SYBR Green或EB相同的检测体系。Gel-Green Plus具有和Gel-Green、SYBR Green或SYBR Gold几乎相同的光学性质,激发光和发射光都非常接近,这样可以直接用Gel-Green Plus替换Gel-Green或SYBR Green,以使用Gel-Green或SYBR Green的凝胶观察、拍照或成像系统(约500nm激发)。对于原来用于EB染料观察的系统,可以考虑选用碧云天的Gel-Red染料来替代EB,但也可以使用没有致突变性的Gel-Green Plus来替代EB。使用Gel-Green Plus来替代EB,并且用EB的紫外检测体系时,检测灵敏度会比使用Gel-Red低约4-5倍。对于既可以观察EB也可以观察Gel-Green或SYBR Green的具有紫外和蓝光两种激发光的凝胶成像系统,则推荐直接用Gel-Green Plus来替换EB。Gel-Green Plus的激发光谱和发射光谱请参考图1。
图1.Gel-Green Plus的激发光谱和发射光谱
Gel-Green Plus的使用方法和Gel-Green、EB一致。Gel-Green Plus可以按适当比例直接加入琼脂糖中配制成凝胶,也可以在电泳完毕后对凝胶进行染色。前者更加方便,而后者灵敏度要更加高一些。但由于Gel-Green Plus本身已经非常灵敏,通常采用把Gel-Green Plus直接配制在凝胶中就可以了。对于一些特殊的情况,如核酸样品量特别少的情况等,则可以考虑电泳后再对凝胶进行染色。
Gel-Green Plus对条带迁移几乎没有影响。使用Gel-Green Plus时,样品的上样量不影响条带美观,即使上样量很高,也可获得良好的条带分离效果。
Gel-Green Plus可大大降低条带的拖尾和弯曲,条带更清晰、更均匀、背景更低。Gel-Green存在一定程度的条带拖尾、弯曲、背景高等现象,Gel-Green Plus基本解决了这些问题,而且分子量大的条带也可得到完美的分离效果。
通过凝胶回收试剂盒(如碧云天或Qiagen的凝胶回收试剂盒)或酚氯仿抽提,可以有效去除与DNA或RNA结合的Gel-Green Plus,从而确保不会影响后续的连接、酶切、PCR、测序等常规的分子生物学用途。
包装清单:
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
D0147-0.2ml |
Gel-Green Plus (EB升级换代产品, 10000X) |
0.2ml |
D0147-1ml |
Gel-Green Plus (EB升级换代产品, 10000X) |
1ml |
- |
说明书 |
1份 |
保存条件:
室温保存,至少两年有效。