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- 2025年07月14日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
33
- 英文名：
Coomassie Brilliant Blue Method Protein Content Test Kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
50管/48样
考马斯亮蓝法测蛋白含量测定试剂盒说明书
分光光度法 50 管/48 样
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。测定原理：
在酸性溶液中，考马斯亮蓝 G-250 与蛋白质结合形成蓝色复合物；该复合物在 620nm 处有最大吸收峰， 其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比。该方法灵敏度高，适合微量蛋白质分析。自备仪器和用品：
离心机、分光光度计、石英比色皿、移液器和蒸馏水。试剂组成和配制：
试剂一：液体 30 mL×1 瓶，4℃保存。样品中可溶性蛋白质提取：
- 液体样品：澄清液体样品可以直接测定。
- 组织样品：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：20 的比例（建议称取约 0.05 g 组织，加入 1mL 提取液（自备，根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水））冰浴匀浆，8000g，4℃离心 10min，取上清，即待测液。（动物样品常常需要稀释）
- 细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7
测定操作：
- 分光光度计预热 30 min，蒸馏水调零。
- 在石英比色皿中加入：
| 试剂（μL） | 测定管 | 空白管 |
| 样本 | 500 | |
| 蒸馏水 | 500 | |
| 试剂一 | 500 | 500 |
| 混匀后，测定波长 620 nm 吸光值，△A=A 测定-A 空白。 | ||
1、 空白管只需要测定一次。
2、 测定管若出现浑浊或分层现象，说明蛋白含量较高，须将待测液用提取液稀释 10~20 倍后重新检测。
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计算公式：
标准曲线：y = 14.253x - 0.0007 R2 = 0.9997 x: 蛋白标准品浓度(mg/mL)y: 吸光值差值
1.按液体样本体积计算：Cpr（mg/mL）=(△A+0.0007)÷14.253
=0.07×(△A+0.0007)
2.按组织样本质量计算：Cpr（mg/g 鲜重）=(△A+0.0007)÷14.253×V 总÷W
=0.07×(△A+0.0007)÷W
V 总：提取液体积，1 mL; W：样本质量，g。
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