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碱性木聚糖酶测定试剂盒

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  • 2025年07月18日
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      100

    • 英文名

      Alkaline Xylanase Assay Kit

    • CAS号

    • 保质期

      1年

    • 供应商

      上海晅科生物科技有限公司

    • 保存条件

      2-8℃

    • 规格

      100管/48样

    产品细节图片1

    碱性木聚糖酶(Basic Xylanase,BAX)测定试剂盒

    微量法 100T/48S

    注意:正式测定之前选择 2+3 个预期差异大的样本做预测定。

    测定意义:

    木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生,能催化水解木聚糖,也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶,可分解酿造或饲料工业碱的原料细胞壁以及 β+葡聚糖,降低酿造碱物料的粘度,促进有效物质的释放,以及降低饲料碱的非淀粉多糖,促进营养物质的吸收利用,因而广泛的应用于酿造和饲料工业碱,BAX 一般分离自最适生长 pH 为 9 +11 的微生物。

    测定原理:

    BAX 在碱性环境碱催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖,在沸水浴条件下进一步与 3,5+二硝基水杨酸发生显色反应,在 540nm 处有特征吸收峰,反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比,通过测定反应液在 540nm 吸光值增加速率,可计算 BAX 活力。

    自备实验用品及仪器:

    天平、低温离心机、恒温水浴锅,可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。

    试剂组成和配制:

    缓冲液:液体 65mL×1 瓶,4℃保存。
    试剂一:液体 10mL×1 瓶,4℃避光保存。(若出现白色絮状或颗粒状沉淀,可 60℃加热溶解后使用)。
    试剂二:液体 10mL×1 瓶,4℃避光保存。

    粗酶提取:

    1. 发酵液:发酵液于 8000g,4℃,离心 15min,取上清,作为待测样品。
    2. 酶干粉:称约 0.1mg,加 1mL 缓冲液溶解待测。
    3. 组织样本:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10  的比例(建议称取约 0.1g
    组织,加入 1mL 缓冲液)进行冰浴匀浆,然后 8000g,4℃,离心 10min,取上清待测。

    测定操作表:

    1、 分光光度计/酶标仪预热 30min,调节波长至 540nm。
    2、操作表
      对照管 测定管
    样品(μL) 60 60
    缓冲液(μL) 90 90
    试剂一(μL)   60
    试剂二(μL) 90  
    混匀,盖紧瓶盖,50℃水浴,反应 30min,立即沸水浴 10min 灭活。(注意不要让盖子爆开,
    以免进水,改变了反应体系)
    试剂一(μL) 60  
    试剂二(μL)   90
    混匀,沸水浴显色 5min,取 200µL 于微量石英比色皿/96 孔板中 540nm 处测定吸光值 A,
    计算 ΔA=A 测定管+A 对照管。每个测定管设一个对照管。

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    产品细节图片2产品细节图片3

    BAX 计算公式:

      1. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
    标准曲线:y = 2.8432x - 0.0293,R2 = 0.9985
    1. 按液体体积活力计算:
     
    酶活定义:50℃,pH9.0 条件下,每毫升液体样本每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。
    BAX 活力(nmol/min/mL)= (ΔA+0.0293)÷2.8432÷150÷T×稀释倍数×106
    = 391× (ΔA+0.0293)
    1. 按蛋白浓度计算:
    酶活定义:50℃,pH9.0 条件下,每毫克蛋白每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。
    BAX 活力(nmol/min/mg prot)=  (ΔA +0.0293)÷2.8432÷150÷T×稀释倍数×106÷Cpr
    = 391×(ΔA +0.0293 ) ÷Cpr
    1. 按鲜重计算:
    酶活定义:50℃,pH9.0 条件下,每克样本每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。
    BAX 活力(nmol/min/g 鲜重)= (ΔA +0.0293)÷2.8432÷150÷T×稀释倍数×106÷W
    = 391×(ΔA +0.0293 ) ÷W

    150:木糖的分子量;T:反应时间,30min;稀释倍数=V 反总÷V 样=300µL÷60µL=5;
    106:转化因子,即 1mg/mL=106ng/mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g。
      1. 用 96 孔板测定的计算公式如下
    标准曲线:y = 1.4216x - 0.0293,R2 = 0.9985
    1. 按液体体积活力计算:
    酶活定义:50℃,pH9.0 条件下,每毫升液体样本每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。
    BAX 活力(nmol/min/mL)= (ΔA+0.0293)÷1.4216÷150÷T×稀释倍数×106
    = 782× (ΔA+0.0293)
    1. 按蛋白浓度计算:
    酶活定义:50℃,pH9.0 条件下,每毫克蛋白每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。
    BAX 活力(nmol/min/mg prot)=  (ΔA +0.0293)÷1.4216÷150÷T×稀释倍数×106÷Cpr
    = 782×(ΔA +0.0293 ) ÷Cpr
    1. 按鲜重计算:
    酶活定义:50℃,pH9.0 条件下,每克样本每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。
    BAX 活力(nmol/min/g 鲜重)= (ΔA +0.0293)÷1.4216÷150÷T×稀释倍数×106÷W
    = 782×(ΔA +0.0293 ) ÷W

    150:木糖的分子量;T:反应时间,30min;稀释倍数=V 反总÷V 样=300µL÷60µL=5;
    106:转化因子,即 1mg/mL=106ng/mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g。

     

    注意事项:

    1. 吸光度变化应该控制在 0.01~0.8 之间,否则加大样品量或稀释样品,注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变;也可以延长或者缩短反应时间。
    2. 试剂盒 2+8℃保存,保质期 3 个月,建议尽快使用。
    产品细节图片4

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