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单胺氧化酶生化试剂盒

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  • XK-SJH-A712
  • 国产
  • 2025年07月11日
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      100

    • 英文名

      Monoamine oxidase test kit

    • CAS号

    • 保质期

      1年

    • 供应商

      上海晅科生物科技有限公司

    • 保存条件

      2-8℃

    • 规格

      50管/48样

    产品细节图片1
    单胺氧化酶(Monoamine Oxidase,MAO)试剂盒说明书

    分光光度法 50 管/48 样注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

    测定意义
    MAO(EC1.4.3.4) 主要存在于脊椎动物的各种器官,特别是分泌腺、脑、肝脏,在无脊椎动物、豆类的芽等植物中也存在催化单胺类物质代谢,含量较低,具有重要的生理功能,其活性能反映肝纤维化的程度。此外,MAO 活性异常导致细胞内单胺类神经递质运转出现紊乱, 从而引发多种病症。

    测定原理

    MAO 催化单胺类底物脱氨生成相应的醛,进一步氧化成酸;底物在 360nm 处有特征吸收峰, 测定 360nm 光吸收下降的速率,计算 MAO 活性。

    自备实验用品及仪器

    天平、低温离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、蒸馏水。

    试剂组成和配制

    提取液一:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。提取液二:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。试剂一:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。试剂二:液体 6mL×1 瓶,4℃避光保存。粗酶液提取
    1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,
    加入 1mL 提取液一)进行冰浴匀浆,10000g,4℃,离心 10min,弃沉淀;把上清转移到另一预冷的离心管,10000g,4℃,离心 30min,弃上清;加入 1.0 mL 预冷的提取液二,震荡混匀,16000g,4℃,离心 40min,弃上清;沉淀加入预冷的 1.0 mL 试剂一, 震荡混匀,即粗酶液(可用于可溶性蛋白浓度测定)取上清置于冰上待测。
    1. 细菌、真菌:按照细胞数量(104  个):提取液体积(mL)为 500~1000:1  的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7秒,总时间 3min);然后 10000g,4℃,离心 10min,弃沉淀;把上清转移到另一预冷的离心管,10000g,4℃,离心 30min,弃上清;加入 1.0 mL 预冷的提取液二,震荡混匀,16000g,4℃,离心 40min,弃上清;沉淀加入预冷的 1.0 mL 试剂一,震荡混匀, 即粗酶液(可用于可溶性蛋白浓度测定),取上清置于冰上待测。
    2. 血清:直接测定。
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    产品细节图片2产品细节图片3

    测定步骤:
    1、 分光光度计预热 30min,调节波长至 360nm,蒸馏水调零。
    2、操作表
      空白管 测定管
    酶液(µL)   100
    试剂一(µL) 900 800
    试剂二(µL) 100 100
    混匀,立即测定 360nm 处测定管和空白管吸光值,分别记为 A1 和A2;然后 37℃反应 60min,
    再次测定 360nm 处测定管和空白管吸光值,分别记为 A3 和A4;计算ΔA=(A1-A2)-(A3-A4)

    注意:空白管只需测定一次。

     
    MAO 活性计算公式

    1、按蛋白含量计算

    酶活定义:37℃,pH7.6 时,每毫克蛋白质 1min 内转化 1nmol 底物的酶量为一个酶活单位。
    DA

    MAO 活性(nmol/min / mg prot)= e ´ d ×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T= 114×ΔA÷Cpr

    2、按样本质量计算

    酶活定义:37℃,pH7.6 时,每克样品 1min 内转化 1nmol 底物的酶量为一个酶活单位。
    DA

    MAO 活性(nmol/min /g 鲜重)= e ´ d ×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)÷T = 114×ΔA÷ W

    3、按照细胞数量计算

    酶活定义:37℃,pH7.6 时,每 104 个细胞 1min 内转化 1nmol 底物的酶量为一个酶活单位。
    DA
     
    MAO 活性(nmol/min / 104 cell)=

    e ´ d

    ×V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量)÷T

    = 114×ΔA÷细胞数量

    4、按照液体体积计算

    酶活定义:37℃,pH7.6 时,每 mL 血清 1min 内转化 1nmol 底物的酶量为一个酶活单位。
    DA

    MAO 活性(nmol/min /mL)= e ´ d ×V 反总÷V 样=114×ΔA
    ε:底物摩尔消光系数,1460 L/mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 反总:反应总体积,1mL; V 样:反应中样本体积,0.1mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度, mg/mL;T:反应时间,60min,W:样本质量,g

     

    注意事项

    1、吸光度变化应该控制在 0.01~0.8 之间。否则加大样品量或稀释样品,注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变。
    2、样品蛋白质含量需要另外测定。

    产品细节图片4

     

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