- ￥3980
- Xkbio
- XK-SJH-A393
- 国产
- 2025年07月12日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
69
- 英文名：
3-phosphoglycerate kinase (PGK) test kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
50管/48样
3-磷酸甘油酸激酶（3-Phosphoglycerate kinase，PGK）试剂盒说明书
分光光度法 50 管/48 样
3-磷酸甘油酸激酶是糖酵解的关键酶，广泛存在于动植物和微生物体内，催化 1，3-二磷酸甘油酸转变为 3-磷酸甘油酸，产生 1 分子 ATP，具有影响 DNA 复制和修补及刺激病毒 RNA 合成等生物学功能，广泛应用于药物靶标设计。
测定原理
3-磷酸甘油酸激酶催化 3-磷酸甘油酸和 ATP 产生 1,3-二磷酸甘油酸和 ADP，1,3-二磷酸甘油酸在 3-磷酸甘油醛脱氢酶和 NADH 作用下产生 3-磷酸甘油醛、NAD 和磷酸，340nm 处的吸光度变化反映了 3-磷酸甘油酸激酶的活性的高低。自备实验用品及仪器
天平、低温离心机、研钵、紫外分光光度计、1 mL 石英比色皿。试剂组成和配制
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。试剂一：液体 25mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 5mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后
-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂三：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 2.5 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂四：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 2.5 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂五：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 10 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
酶液提取
①总 PGK 酶提取：建议称取约 0.1g 样本，加入 1mL 提取液，冰浴匀浆后超声破碎（冰浴，200W，破碎 3s，间歇 7s，总时间 1min），然后 4℃，500g 离心 5min，取上清测定。
②胞浆和叶绿体 PGK 酶的分离：按照植物组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5～10 的比例（建议称取约 0.1g 样本，加入 1mL 提取液），冰浴匀浆后于 4℃，500g 离心 5min，弃沉淀，取上清在 4℃，8000g 离心 10min，取上清用于测定胞浆 PGK 酶活性，取沉淀加 1mL 提取液，震荡溶解后超声破碎（冰浴，200W，破碎 3s，间歇 7s，总时间 1min），然后 4℃， 500g 离心 5min，取上清测定叶绿体中 PGK 酶活性。
建议测定总PGK 酶活性，按照步骤①提取粗酶液，若需要分别测定胞浆和叶绿体中的 PGK， 则按照步骤②提取粗酶液。
测定操作
- 分光光度计预热 30min，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
- 取 1mL 石英比色皿，依次加入 500μL 试剂一，100μL 试剂二，50μL 试剂三，50μL 试剂四，200μL 试剂五，100μL 粗酶液，充分混匀，记录 340nm 处 10s 的吸光值 A1 和 310s 的吸光值 A2，△A=A1-A2
计算公式
- 按照样本蛋白浓度计算
PGK（nmol/min /mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr
- 按照样本质量计算
PGK（nmol/min /g 鲜重）＝ΔA÷（ε×d）×V 反总÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=321.54×ΔA÷W
V 反总：反应体系总体积，1mL；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.1mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g
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文献和实验此反应由3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde 3－phosphatedehydrogenase)催化3-磷酸甘油醛氧化脱氢并磷酸化生成含有1个高能磷酸键的1，3－二磷酸甘油酸，本反应脱下的氢和电子转给脱氢酶的辅酶NAD+生成NADH+H+，磷酸根来自无机磷酸。 (7)1.3－二磷酸甘油酸的高能磷酸键转移反应 在磷酸甘油酸激酶(phosphaglycerate kinase,PGK)催化下，1.3－二磷酸甘油酸生成3-磷酸甘油酸，同时其C1
鼠3-磷酸甘油激酶l(PGKI)基因启动子，活性与CMV-IE相当；人编在蛋白(ubiquitin)C基因启动子不仅具有较高的活性，而且比CMV-IE、PGK1等启动子有更广泛的宿主细胞范围，几乎在转基因小鼠的所有组织细胞中都具有较高活性。核内小RNA(snRNA)启动子亦具有与CMV-IE相近的活性，此前认 为该启动子的转录产物不具有正常mRNA的修饰过程和功能，虽然转录同样是由RNA聚合酶Ⅱ完成；但Bartlett等的研究显示，Ul snRNA启动子合成的lacZ基因RNA可被正确地在5’端
一、分子生物学Promega:Promega公司是分子生物学研究工具的经典品牌，已有接近30年的历史，是生命科学这个朝阳产业中的“老字号”。该公司所特有的萤光素酶生物发光技术，灵敏度高，信号/背景比率低，在基础研究和药物筛选领域内得到广泛的应用和认可。应用范围涉及报告基因检测；细胞学活力、细胞毒作用、细胞凋亡检测；蛋白酶、蛋白激酶、核受体检测，以及描述药物先导物的吸收、分布、代谢、排泄等特征性参数的一系列检测方法。Promega公司一直注重和终端客户的互动，今年推出的主题是 today
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