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- Xkbio
- XK-SJH-A564
- 国产
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
Erythromycin-N-demethylase (ERND) test kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
50管/24样
红霉素-N-脱甲基酶(Erythromycin N-demethylase,ERND)试剂盒说明书
࠶光光度法 50 管/24 ṧ
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差ᔲ大的ṧ本做预测定˚
测定意义:
㓶胞色素P450 酶是一组▲要存在于肝脏的酶系,在外源物质代谢中,尤ަ是药物和毒物的代谢,ާ有重要作用˚ERND 在 P450 酶系中相当于 CYP2B ӊ型,与药物代谢的去甲基化密࠷相关˚CYP2B ާ有催化¾物形成非活性易于排泄的代谢产物而ާ有解毒作用,也可使某Ӌ药物㓿 CYP2B 代谢活化˚
测定原理:
ERND 催化红霉素释放甲醛,通过Nash 比色测定甲醛含䟿,ণ可䇑算出 ERND 活性˚自备仪器和用品:
可见࠶光光度䇑ǃ普通离心机,超速离心机ǃ可调式移液枪ǃ1mL 玻璃比色皿ǃ蒸馏水和冰˚
试剂组成和配制:
试剂一:粉剂×1 瓶,4℃保存˚临用前加 50 mL 蒸馏水溶解˚试剂二:液体×1 瓶,4℃保存˚
试剂й:粉剂×1 瓶,4℃保存˚临用前加 2.6 mL 蒸馏水,充࠶溶解˚试剂四:粉剂×1 瓶,4℃保存˚临用前加 2.6 mL 蒸馏水,充࠶溶解˚试剂五:粉剂×1 瓶,4℃保存˚临用前,加蒸馏水 9 mL 充࠶溶解˚试剂ޝ:液体×1 瓶,4℃保存˚
试剂七:液体×1 瓶,4℃保存˚
标准液:液体×1 瓶,-20℃保存˚临用前取 1.5 mL EP 管,加入 10µl 标准液,加 990µl 蒸馏水,混匀ণѪ 0.05 mmol/L 标准 醛溶液,4℃保存˚
粗酶液提取:
1ǃ除去㓶胞Ṩ,线粒体等大࠶子物质:ƒ约 0.5g 组㓷,加入 1mL 试剂一,冰k充࠶研磨,
10 000g 4℃离心 30min,取k清液,转入超速离心管中˚
2ǃ粗制微粒体:100 000g,4℃,离心 60min,ᔳk清液˚
3ǃ除血红蛋白等杂质:向步骤 2 的沉淀中加 1mL 试剂一,盖紧后充࠶震荡溶解,100 000g
离心 30min,ᔳk清液˚
4ǃ最8微粒体:向步骤 3 的沉淀中加试剂二 0.5mL,充࠶震荡溶解,ণ粗酶液,待测˚该待测液需当天使用˚
测定操作:
- ࠶光光度䇑预热 30 min 以k,调节波长到 412 nm,蒸馏水调零˚
- 试剂二置于 37℃水浴中预热 30 min˚
- 对照管:取 1 支 EP 管,加入 50µL 粗酶液,850µL 试剂二,50µL 试剂й,50µL 蒸馏水,混匀后置于 37℃水浴保温 30min:立ণ加入 175µL 试剂五,混匀后置于冰浴中 5min:取出后加入 175µL 试剂ޝ,混匀后室温静置 5min:室温 8000rpm 离心 5min:取新的 EP 管,加入 500µL k清液,500µL 试剂七,混匀后 60℃水浴 10min,然后取出,用冷水冷K 5min,于 412nm 测定光吸收,记Ѫ A 对照管˚
- 测定管:取 1 支 EP 管,加入 50µL 粗酶液,850µL 试剂二,50µL 试剂й,50µL 试剂四,混匀后置于 37℃水浴保温 30min:立ণ加入 175µL 试剂五,混匀后置于冰浴中 5min:取出后加入 175µL 试剂ޝ,混匀后室温静置 5min:室温 8000rpm 离心 5min:取 1 支新EP 管,
- 标准管:取 1 支 EP 管,加入 500µL 标准品,500µL 试剂七,混匀后 60℃水浴 10min,然后取出,用冷水冷K 5min,于 412nm 测定光吸收,记Ѫ A 标准管˚
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ERND 活性䇑算¿式:
(1) 按照蛋白浓度䇑算:
活性单位定义:37℃7,⇿࠶钟⇿毫克蛋白催化产生 1nmol 甲醛Ѫ 1 个酶活单位˚
ERND 活性(nmol/min/mg prot) = C 标准品×V 标准品×(A 测定管—A 对照管)÷A 标准管×
稀释倍数÷(Cpr×V ṧ)÷T
= 45×(A 测定管—A 对照管)÷A 标准管÷Cpr˚
(2). 按照ṧ本质䟿䇑算:
活性单位定义:37℃7,⇿࠶钟⇿克ṧ品催化产生 1nmol 甲醛Ѫ 1 个酶活单位˚
ERND 活性(nmol/min/g 鲜重) = C 标准品×V 标准品×(A 测定管—A 对照管)÷A 标准管×稀释倍数÷(W×V ṧ)÷T
= 45×(A 测定管—A 对照管)÷A 标准管÷W
C 标准品:0.05 mmol/L=50µmol/L:V 标准品:500µL=0.0005 L:稀释倍数:V 反总÷V k清液=(50+850 +50+50+175+175)÷500=2.7:Cpr:粗酶液蛋白质浓度,mg/mL,需要另外测定,建议使用本¿司 BCA 蛋白质含䟿测定试剂盒:V ṧ:加入粗酶液体〟,50µL=0.05mL: W:ṧ本质䟿,g:T:催化反ƒ时间,30min˚
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文献和实验 组蛋白修饰详情 乙酰化 乙酰化是最早发现的影响转录调控的组蛋白修饰之一，因此目前研究的最多。乙酰化使 从核小体伸出 的 N-末端组蛋白尾部的赖氨酸残基带负电荷，这些负电荷会排斥带负电荷的 DNA，导致染色质结构 松弛。开放的染色质构象允许转录因子结合并显著增加基因表达 (Roth et al., 2001)。 组蛋白乙酰化参与细胞周期调控、细胞增殖和凋亡，并在调节细胞分化、DNA 复制和修复、核输入和 神经元抑制等多种细胞过程中发挥重要作用。组蛋白乙酰
QUANTUMN ACESSES 高效液相色谱�质谱联用仪（赛默飞世尔科技有限公司）;TD5A�WS离心机(上海湘仪离心机厂);均质机（上海弗鲁克流体机械制造有限公司）;旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）;固相萃取装置(Supleco公司)。 红霉素A（纯度≥95%，Dr.Ehrenstorfer Gmbh）;红霉素�13C2（erythromycin A, N，N�Dimethyl�13C2，纯度≥95%，美国剑桥研究所）。乙腈、甲醇（液相色谱纯，Sigma公司）；正己烷、Na2HPO4（分析
S亚基构成，因而它们的生理、生化与功能不同，抗菌药物对细菌的核蛋白体有高度的选择性毒性，而不影响哺乳动物的核蛋白体和蛋白质合成。多种抗生素能抑制细菌的蛋白质合成，但它们的作用点有所不同。①能与细菌核蛋白体50S亚基结合，使蛋白质合成呈可逆性抑制的有氯霉素、林可霉素和大环内酯类抗生素（红霉素等）。②能与核蛋白体30S亚基结合而抑菌的抗生素如四环素能阻止氨基酰tRNA向30S亚基的A位结合，从而抑制蛋白质合成。③能与30S亚基结合的杀菌药有氨基甙类抗生素（链霉素等）。它们的作用是多环节的。影响蛋白质合成
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