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- Xkbio
- XK-SJH-A247
- 国产
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
Superoxide anion test kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
50管/48样
分光光度法 50 管/48 样
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用，但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用，导致机体细胞和组织代谢异常，从而引起多种疾病。
测定原理
超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成 NO2－，NO2－在对氨基ben磺酸和 α－萘胺的作用下，生成红色的偶氮化合物，在 530nm 处有特征吸收峰，根据 ΔA 值可以计算样品中O2－含量，反应式为 NH2OH + 2O2－ ＋H＋ → NO2－ ＋ H2O2 ＋ H2O 。自备实验用品及仪器
天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、氯仿和蒸馏水。试剂组成和配制
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。试剂一：液体 25mL×1 瓶，4℃保存。试剂二：液体 20mL×1 瓶，4℃避光保存。试剂三：液体 20mL×1 瓶，4℃避光保存。试剂四：氯仿，自备。
超氧阴离子提取
- 植物、动物组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃，离心 20min，取上清置于冰上待测。。
- 细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 20min，取上清置于冰上待测。
- 血清或培养液：直接测定。
测定操作表
| 空白管 | 测定管 | |
| 样本（μL） | 500 | |
| 提取液（μL） | 500 | |
| 试剂一（μL） | 400 | 400 |
| 混匀，37℃水浴 20min | ||
| 试剂二（μL） | 300 | 300 |
| 试剂三（μL） | 300 | 300 |
| 混匀，37℃水浴 20min | ||
| 试剂四（μL） | 500 | 500 |
| 混匀，8000g，25℃，离心 5min，小心吸取上层水相 1mL， 1mL 玻璃比色皿，蒸馏水调零， 测定A530。ΔA=A 测定-A 空白，空白管只要做一管。 相关图片：   |
||
标准曲线：y = 0.0242x - 0.0027，R2=0.9980
- 组织：
- 按照样本质量计算
=148.76×( ΔA +0.0027)÷W
超氧阴离子产生速率（nmol/ g·min ）=148.76×( ΔA+0.0027)÷W÷T
=7.44× ( ΔA +0.0027)÷W
- 按照蛋白质浓度计算
=148.76×(ΔA+0.0027)÷Cpr
超氧阴离子产生速率（nmol/ mg prot·min ）= 148.76×( ΔA+0.0027)÷Cpr÷T
=7.44× ( ΔA+0.0027)÷Cpr
- 细菌，真菌：
= 148.76×( ΔA+0.0027)÷细胞数量
超氧阴离子产生速率（nmol/104 cell·min ）= 148.76×(ΔA+0.0027)÷细胞数量÷T
=7.44× ( ΔA+0.0027)÷细胞数量
- 血清或培养液
=148.76× ( ΔA+0.0027)
超氧阴离子产生速率（nmol/mL·min ）= 148.76× ( ΔA+0.0027) ÷T
= 7.44× ( ΔA+0.0027)
V 样总：加入提取液体积，1 mL； V 反总：反应总体积，0.9mL；V 样：反应中样品体积， 0.5mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g；T：反应时间，20min；2： 2 分子O2－参与反应生成 1 分子 NO2－。
注意事项
1、 吸光值大于 2，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。2、 样品制备好之后，立刻进行测定，请勿将样品进行长时间的低温保存，以免影响测定结果。
3、 试剂四有一定的毒性，请操作时做好防护措施。
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文献和实验1. 催化特点 ① 高效性 ② 专一性 键专一、基团专一、绝对或几乎绝对专一 ③ 可调节性 酶浓度调节、激素调节、共价修饰调节、限制性蛋白酶的水解作用与酶活调节、抑制剂的调节、反馈调节、金属离子和其他小分子化合物的调节。 2. 影响酶活因素 ①. 酶活测定方式 测定酶活，必须了解酶催化反应总的反应式，而且分析程序必须能够测定底物的消失或产物的生产。还需考虑辅助因子、酶的最适pH值和最适温度。 ②. 酶联测定法 过氧化物酶和它的共底物或辅酶必须过量，使酶联测定不属于限速步骤。 ③ 酶
针对同一指标，生化试剂盒和 ELISA 试剂盒的检测结果趋势是一致的吗？
一、两种方法检测原理 两种方法的基本原理都是朗伯-比尔定律，但是具体形成过程和检测的方法不一样的。 1) 生化试剂盒检测原理 生化试剂盒检测的本质就是某物质化学变化的显色反应，其反应过程可以划分为四个区：延迟区、等速区、过渡区和平衡区，以时间为横坐标、吸光度为纵坐标作图，如下所示： 延迟区：无规律可寻。 等速区：对应的是速率法，一般应用于酶活力的检测。 过渡区：对应的是固定时间法，目的是解决某些化学反应的非特异性问题，提高准确度。 平衡区：对应的是终点法，主要是测定某物质在样本中的含量。 目前
氧依赖性杀菌途径 Mφ和中性粒细胞吞噬病原体后随之活化，在短时间内耗氧量显著增加，形成的氧代谢物对病原体有很强的杀伤作用，这一现象称为呼吸爆发(respiratoryburst)。其中的启动因素是位于胞质和吞噬体膜上的一种复合酶，称为烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(NADPH)氧化酶，该酶和吞噬体膜成分组合后，可将氧分子还原成超氧阴离子，并进一步产生游离羟基和过氧化氢，并在过氧化物酶和铁离子的参与下转化为单态氧。这些活性氧中间物具有很强的氧化和细胞毒性作用，可有
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