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- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
Erythromycin-N-demethylase (ERND) test kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
100管/48样
红霉素-N-脱甲基酶(ERNDP活性测定试剂盒说明书
微量法 100T/48S
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差ᔲ大的ṧ本做预测定˚测定意义：
㓶胞色素P450 酶是一组▲要存在于肝脏的酶系,在外源物质代谢中,尤ަ是药物和毒物的代谢,ާ有重要作用˚ERND 在 P450 酶系中相当于 CYP2B ӊ型,与药物代谢的去甲基化密࠷相关˚CYP2B ާ有催化¾物形成非活性易于排泄的代谢产物而ާ有解毒作用,也可使某Ӌ药物㓿 CYP2B 代谢活化˚测定原理：
ERND 催化红霉素释放甲醛,通过Nash 比色测定甲醛含䟿,ণ可䇑算出 ERND 活性˚自备仪器和用品：
普通离心机,超速离心机ǃ可调式移液枪ǃ可见࠶光光度䇑/酶标仪ǃ微䟿石英比色皿/96 孔板ǃ蒸馏水和冰˚试剂组成和配置：
试剂一:粉剂核1 瓶,4℃保存˚临用前加 100mL 蒸馏水溶解˚ 试剂二:液体核1 瓶,4℃保存˚试剂й:粉剂核1 管,4℃保存˚临用前加 1mL 蒸馏水,充࠶溶解˚ 试剂四:粉剂核1 瓶,4℃保存˚临用前加 0.5mL 蒸馏水,充࠶溶解˚ 试剂五:粉剂核1 瓶,4℃保存˚临用前,加蒸馏水 4.5mL 充࠶溶解˚ 试剂ޝ:液体核1 瓶,4℃保存˚
试剂七:液体核1 瓶,4℃保存˚
标准液:液体核1 瓶,-20℃保存˚临用前取 1.5mL EP 管,加入 10µl 标准液,加 990µl 蒸馏水,混匀ণѪ 0.05 mmol/L 标准 醛溶液,4℃保存˚
粗酶液提取：
1ǃ除去㓶胞Ṩ,线粒体等大࠶子物质:ƒ约 0.5g 组㓷,加入 1mL 试剂一,冰k充࠶研磨,10 000g 4℃离心 30min,取k清液,转入超速离心管中˚
2ǃ粗制微粒体:100 000g,4℃,离心 60min,ᔳk清液˚
3ǃ除血红蛋白等杂质:向步骤 2 的沉淀中加 1mL 试剂一,盖紧后充࠶震荡溶解,100 000g
离心 30min,ᔳk清液˚
4ǃ最8微粒体:向步骤 3 的沉淀中加试剂二 0.5mL,充࠶震荡溶解,ণ粗酶液,待测˚该待测液需当天使用˚
测定操作：
- ࠶光光度䇑/酶标仪预热 30 min,调节波长到 412 nm,蒸馏水调零˚
- 试剂二置于 37℃水浴中预热 30 min˚
- 对照管:取 0.5mL EP 管,加入 10µL 粗酶液,170µL 试剂二,10µL 试剂й,10µL 蒸馏水,混匀后置于 37℃水浴保温 30min:立ণ加入 35µL 试剂五,混匀后置于冰浴中 5min:取出后加入 35µL 试剂ޝ,混匀后室温静置 5min:室温 8000rpm 离心 5min:取新的 EP 管,加入 100µL k清液,100µL 试剂七,混匀后 60℃水浴 10min,然后取出,用冷水冷K 5min,于 412nm 测定光吸收,记Ѫ A 对照管˚
- 测定管:取 0.5mL EP 管,加入 10µL 粗酶液,170µL 试剂二,10µL 试剂й,10µL 试剂四,混匀后置于 37℃水浴保温 30min:立ণ加入 35µL 试剂五,混匀后置于冰浴中 5min:取出后加入 35µL 试剂ޝ,混匀后室温静置 5min:室温 8000rpm 离心 5min:取新 EP 管,加入
412nm 测定光吸收,记Ѫ A 测定管˚
- 标准管:取 0.5mL EP 管,加入 100µL 标准品,100µL 试剂七,混匀后 60℃水浴 10min,然后取出,用冷水冷K 5min,于 412nm 测定光吸收,记Ѫ A 标准管˚
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ERND 活性计算公式：
- 使用微䟿石英比色皿测定的䇑算¿式如7 (1). 按照蛋白浓度䇑算:
ERND 活性(nmol/min/mg prot) = C 标准品×V 标准品×(A 测定管—A 对照管)÷A 标准管×
稀释倍数÷(Cpr×V ṧ)÷T
= 45×(A 测定管—A 对照管)÷A 标准管÷Cpr˚
(2). 按照ṧ本质䟿䇑算:
活性单位定义:37℃7,⇿࠶钟⇿克ṧ品催化产生 1nmol 甲醛Ѫ 1 个酶活单位˚
ERND 活性(nmol/min/g 鲜重) = C 标准品×V 标准品×(A 测定管—A 对照管)÷A 标准管×
稀释倍数÷(W×V ṧ)÷T
= 45×(A 测定管—A 对照管)÷A 标准管÷W
C 标准品:0.05 mmol/L=50µmol/L:V 标准品:100µL=1核10-4 L:稀释倍数:V 反总÷V k清液=(50+850 +50+50+175+175)÷500=2.7:Cpr:粗酶液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定,建议使用本¿司BCA 蛋白质含䟿测定试剂盒:W:ṧ品质䟿,g:V ṧ:加入粗酶液体〟,10µL=0.01mL:T:催化反ƒ时间(min),30min˚
- 使用 96 孔板测定的䇑算¿式如7 (1). 按照蛋白浓度䇑算:
ERND 活性(nmol/min/mg prot) = C 标准品×V 标准品×(A 测定管—A 对照管)÷A 标准管×
稀释倍数÷(Cpr×V ṧ)÷T
= 45×(A 测定管—A 对照管)÷A 标准管÷Cpr˚
(2). 按照ṧ本质䟿䇑算:
活性单位定义:37℃7,⇿࠶钟⇿克ṧ品催化产生 1nmol 甲醛Ѫ 1 个酶活单位˚
ERND 活性(nmol/min/g 鲜重) = C 标准品×V 标准品×(A 测定管—A 对照管)÷A 标准管×
稀释倍数÷(W×V ṧ)÷T
= 45×(A 测定管—A 对照管)÷A 标准管÷W
C 标准品:0.05 mmol/L=50µmol/L:V 标准品:100µL=1核10-4 L:稀释倍数:V 反总÷V k清液=(50+850 +50+50+175+175)÷500=2.7:Cpr:粗酶液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定,建议使用本¿司BCA 蛋白质含䟿测定试剂盒:W:ṧ品质䟿,g:V ṧ:加入粗酶液体〟,10µL=0.01mL: T:催化反ƒ时间(min),30min˚
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文献和实验相关实验
）1-3. 传统上，生物材料中兽药残留由微生物和免疫组化技术进行分析4。而这些方法可以为特定类别的化合物提供一种快速经济的筛查方法，每种测试盒一般仅对一种化合物有效，对模糊物质的鉴定缺乏选择性，且结果仅近似定量。至于阳性结果，政府法规部门通常要求更加精确的色谱分析方法以确定抗生素的存在及含量。 由于MRLs相关法规变得更加严格，发展定量方法以及确认和鉴定技术以使假阳性结果最小化就更为重要。飞行时间质谱法（TOF MS）筛查具有一定的优势，如历史数据追踪、简化仪器方法设定和在增加化合物数量时
技术资料红霉素-N-脱甲基酶（ERND）测试盒
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