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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
100
- 英文名:
Reducing sugar content test kit
- CAS号:
无
- 保质期:
1年
- 供应商:
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件:
2-8℃
- 规格:
100管/48样

还原糖含量试剂盒说明书
微量法 100 管/48 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义:
还原糖广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。植物体内的还原糖主要包括葡萄糖、果糖和麦芽糖等,是最常见的单糖和双糖,其中葡萄糖和果糖不仅是呼吸作用的主要底物, 也是进一步合成蔗糖、淀粉和纤维素的底物。测定原理:
加热促进碱性溶液中 3,5-二硝基水杨酸溶液与还原糖生成棕红色氨基化合物,在 540nm 有特征吸收峰;在一定的浓度范围内,还原糖含量与 540nm 吸光度成线性关系,根据标准曲线,即可求出样品中还原糖的量。需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、蒸馏水。试剂的组成和配制:
试剂一:100mL×1 瓶,4℃保存; 试剂二:8mL×1 瓶 ,4℃保存; 样品中还原糖的提取:1、细菌或细胞的处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量
(104 个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3S,间隔 10S,重复 30次),转移到有盖离心管中(防止加热时水分散失),80℃水浴中 40min 并且振荡 8~10 次, 8000g,25℃离心 10min,取上清供测定用。
2、组织的处理:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g组织,加入 1mL 试剂一),冰浴匀浆,转移到有盖离心管中(防止加热时水分散失),80℃水浴中 40min 并且振荡 8~10 次,8000g 吧,25℃离心 10min,取上清供测定用。
3、血清(浆)的处理:按照血清(浆)体积(mL):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议取 0.1mL 血清(浆)加入 1mL 试剂一),冰浴匀浆,转移到有盖离心管中(防止加热时水分散失),80℃水浴中 40min 并且振荡 8~10 次,8000g,25℃离心 10min,取上清供测定用。测定步骤:
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 540nm,蒸馏水调零。
2、 调节水浴锅至 95℃。
3、 在 EP 管中加入下列试剂:
| 试剂(μL) | 对照管 | 测定管 |
| 样本 | 175 | 175 |
| 试剂二 | 125 | |
| 蒸馏水 | 125 |
注意:如果 ΔA 大于 2,需要将样本用试剂一稀释,计算公式中乘以相应稀释倍数(若显色
后出现分层现象,可改用蒸馏水稀释)。相关图片:

- 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
2、按样本鲜重计算:
还原糖(μg/g 鲜重)=[1000×(ΔA+0.3034)÷ 8.3796×V1]÷(W×V1÷V2)=119.34×(ΔA+0.3034)÷W
3、按样本蛋白浓度计算:
还原糖(μg/mg prot)=[1000×(ΔA+0.3034)÷ 8.3796×V1]÷(V1×Cpr)=119.34×(ΔA+0.3034)÷Cpr
4、按细菌或细胞密度计算:
还原糖(μg /104 cell)=[1000×(ΔA+0.3034)÷ 8.3796×V1]÷(500×V1÷V2)=0.239×(ΔA+0.3034)
5、按血清(浆)体积计算:
还原糖(μg/mL)=[1000×(ΔA+0.3034)÷ 8.3796×V1]÷(V3×V1÷V2)=1193.4×(ΔA+0.3034)
1000:1mg/mL=1000µg/mL;V1:加入样本体积,0.175mL;V2:加入试剂一体积,1 mL; V3:加入血清(浆体积),0.1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。
- 用 96 孔板测定的计算公式如下
y 为吸光值。
2、按样本鲜重计算:
还 原 糖 (μg/g 鲜 重 ) = [1000×(ΔA + 0.3034)÷4.1898×V1]÷(W×V1÷V2)=238.67×(ΔA +
0.3034)÷W
3、按样本蛋白浓度计算:
还 原 糖 ( μg/mg prot ) = [1000×(ΔA + 0.3034)÷4.1898×V1]÷(V1×Cpr)=238.67×(ΔA +
0.3034)÷Cpr
4、按细菌或细胞密度计算:
还原糖(μg/104 cell)= [1000×(ΔA+0.3034)÷4.1898×V1]÷(500×V1÷V2)=0.477×(ΔA+0.3034)
5、按血清(浆)体积计算:
还原糖(μg/mL)=[1000×(ΔA+0.3034)÷4.1898×V1]÷(V3×V1÷V2)=2386.7×(ΔA+0.3034)
1000:1mg/mL=1000µg/mL;V1:加入样本体积,0.175mL;V2:加入试剂一体积,1 mL; V3:加入血清(浆体积),0.1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。
注意:最低检测限为 1mg/g 鲜重或 10μg/mg prot
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文献和实验二价铜离子为一价铜离子,产生砖红色的氧化亚铜沉淀,其本身被氧化。具体反应如下:(2)氧化亚铜在酸性条件下,可将钼酸铵还原,还原型的钼酸铵再与砷酸氢二钠起作用,生成一种蓝色复合砷钼蓝,其颜色深浅在一定范围内与还原糖的含量(即被还原的Cu2O 量)成正比,用标准葡萄糖与砷钼酸作用,比色后做标准,就可测得样品还原糖含量。三、实验材料、主要仪器和试剂1.实验材料苹果、面粉等。2.主要仪器(1)分光光度计(2)水浴锅(3)具塞刻度试管:20mL×10(4)刻度吸管:1 mL×1.2 mL×4.5 mL×
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