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- XK-SJH-A491
- 国产
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
33
- 英文名：
Cell wall insoluble acid invertase (B-AI) test kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
50管/24样
细胞壁不溶性酸性转化酶（cell-wall binding acid invertase, B-AI）
试剂盒说明书
分光光度法 50 管/24 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：
蔗糖转化酶（Invertase，Ivr）催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。根据最适 pH，Ivr 分为酸性转化酶（AI）和中性转化酶（NI）两种类型。AI 的最适 pH 为 3～5。AI 分为可溶性 AI(S-AI)和细胞壁不溶性 AI（B-AI）两种类型。B-AI 存在于细胞间隙并结合在细胞壁上，主要参与韧皮部质外体卸载时蔗糖的分解，以维持库源之间蔗糖的浓度。
测定原理：
B-AI 催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与 3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物， 在 510nm 有特征光吸收，在一定范围内 510nm 光吸收增加速率与 B-AI 活性成正比。自备用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。试剂组成和配制：
提取液 1：液体 50mL×1 瓶，4℃保存; 提取液 2：液体 50mL×1 瓶，4℃保存; 试剂一：液体 50mL×1 瓶，4℃保存;试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 25mL 试剂一充分溶解备用；用不完的试剂 4℃ 保存;
试剂三：液体 30mL×1 瓶，4℃保存；
粗酶液提取：
按照组织质量（g）：提取液 1 体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL提取液 1），进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心 10min，弃上清，沉淀中加入 1mL 蒸馏水，充分震荡混匀，12000g 4℃离心 10min，弃上清，沉淀中加入 1mL 提取液 2 充分混匀，4℃浸提过夜，12000g 4℃离心 20min，取上清置冰上待测。测定步骤和加样表：
| 试剂名称（μL） | 测定管 | 对照管 |
| 样本 | 200 | 200 |
| 试剂一 | 800 | |
| 试剂二 | 800 |
| 试剂三 | 500 | 500 |
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B-AI 活性计算：
标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0016x -0.001；x 为标准品浓度（μg/mL），y 为吸光值。
- 按蛋白浓度计算：
B-AI 活性（μg/min/mg prot）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=20.8×(ΔA +0.001)
÷Cpr
- 按鲜重计算：
B-AI 活性（μg/min/g 鲜重）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(W ×V1÷V2) ÷T =20.8×(ΔA +0.001)
÷W
V1：加入反应体系中样本体积，0.2mL；V2：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，30min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。
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文献和实验体积。 4. 样品匀浆 匀浆充分与否是决定总RNA 和基因组DNA 得率的关键。匀浆前，动物组织用液氮碾磨分散细胞，酵母菌需酶解制备成原生质体或用液氮碾磨破坏细胞壁，以提高裂解效率。动物细胞可直接进行匀浆。匀浆时用带4～6 号针头的1 ml 注射器反复快速吸注溶液，将基因组DNA 剪切成相对较小的片段，以降低溶液的粘稠性。匀浆完全时，溶液不再粘稠，很容易从注射器针头上呈不连续滴状滴落，而非连续状。 5. 沉淀蛋白质与基因组DNA 在匀浆中加入Buffer R-B，促使蛋白质发生变性凝集并与基因
buffer 到65℃ ；(b)称取大豆粉0.1g ,放入2ml Eppendorf 管；(c)加入400μl AP1 buffer 和4μl RNase (100mg/ml )，混匀，注重避免皮肤接触AP1 buffer ，65℃孵育10-15min ；(d)加入130μl AP2buffer ,混匀，置于冰上5min ,(在酸性溶液中蛋白质和多聚糖可发生沉淀)，冰浴，沉淀未折叠的蛋白质，或使其他蛋白质发生错误折叠，并灭活DNA 酶。溶液AP2含乙酸，应避免皮肤接触； (e)12000×g将混合
could be the day，欢迎您的来访，并且和Promega一起分享您的梦想！Invitrogen：该公司成功地提供了PCR产物快速克隆试剂盒，及与之配套的系列产品，包括高效转染和转化试剂、高效感受态细胞、全面的原核及真核基因表达系统、酵母双杂交系统等多种特色产品。大大便利了分子克隆的全过程操作。其成功并购了Gibco/BRL，Novex，Research Genetics等知名公司，产品覆盖更为广泛。Clontech：现已成为B.D.公司旗下分子生物学主力舰。该公司的cDNA试剂盒、荧光蛋白报告基因系统、酵母
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