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- XK-SJH-A779
- 国产
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
33
- 英文名：
Ribulose diphosphate carboxylase/oxygenase (Rubisco) test kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
50管/48样
二磷酸核酮糖羧化酶（Rubisco）试剂盒
分光光度法 50 管/48 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：
二磷酸核酮糖羧化酶（EC 4.1.1.39）是植物光合作用中的一个关键酶，既控制着CO2的固定， 同时又制约着碳素向Calvin循环和光呼吸循环分流，其活性的大小直接影响着光合速率。 测定原理：（1）在 Rubisco 的催化下，1 分子的核酮糖-1，5-二磷酸（RuBP）与 1 分子的 CO2 结合，
产生 2 分子的 3-磷酸甘油酸（PGA）；（2）PGA 可通过外加的 3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脱氢酶的作用，产生甘油醛-3-磷酸，伴随着 NADH 氧化生成NAD+；（3）在 340 nm NADH有特征吸收峰，而 NAD+没有此吸收峰，因此测定 340nm 吸光度下降速率可以代表 Rubisco 的羧化酶活性。
需自备的仪器和用品：
可见-紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。试剂的组成和配制：
提取液一：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。提取液二：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。试剂一：60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前加入 25mL 试剂一，充分混匀待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
试剂三：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前加入 25mL 试剂一，充分混匀待用；用不完的试剂
分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
试剂四：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前加入 2.5 mL 试剂一，充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
（注意：试剂二、三、四溶解后，按需分装-20℃保存。）
粗酶液制备：
①总 Rubisco 酶提取：建议称取约 0.1g 样本，加入 1mL 提取液一，冰浴匀浆后超声破碎（冰浴，200W，破碎 3s，间歇 7s，总时间 1min），然后 4℃，8000g 离心 10min，取上清测定。②胞浆和叶绿体 Rubisco 酶的分离：按照植物组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5～10的比例（建议称取约 0.1g 样本，加入 1mL 提取液一），冰浴匀浆后于 4℃，200g 离心 5min， 弃沉淀，取上清在 4℃，8000g 离心 10min，取上清用于测定胞浆 Rubisco 酶活性，取沉淀加 1mL 提取液二，震荡溶解后超声破碎（冰浴，200W，破碎 3s，间歇 7s，总时间 1min），然后 4℃，8000g 离心 10min，取上清测定叶绿体中 Rubisco 酶活性。
建议测定总 Rubisco 酶活性，按照步骤①提取粗酶液，若需要分别测定胞浆和叶绿体中的
Rubisco，则按照步骤②提取粗酶液。
相关图片：
测定步骤：
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2、 样本测定
- 工作液的配制：临用前将试剂二和试剂三 1：1 混合，用多少配多少；
- 在 1mL 石英比色皿中加入 50uL 样本、50uL 试剂四和 900uL 工作液，混匀，立即记录 340nm 处 20s 时吸光值 A1 和 5min20s 时的吸光值 A2，计算ΔA=A1-A2。
Rubisco 活性计算：
1、按样本蛋白浓度计算单位的定义：25℃中 1 mg 蛋白 1 min 氧化 1 n mol NADH。
Rubisco（nmol/min /mg prot）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr) ÷T =643×ΔA÷Cpr 此法需要测定粗酶液中蛋白质浓度，建议选购本公司生产的 BCA 蛋白质浓度测定试剂盒。2、按样本鲜重计算
单位的定义：25℃中 1 g 组织 1 min 氧化 1 nmol NADH。
Rubisco（nmol/min/g 鲜重）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样÷V 样总×W) ÷T=643×ΔA÷W
上述计算公式中各符合含义：
V 反总：反应体系总体积，1×10-3 L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.05 mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，5 min；W：样本质量，g。
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文献和实验尔化学奖。（一）C3途径的反应过程C3途径是光合碳代谢中最基本的循环，是所有放氧光合生物所共有的同化CO2的途径。1.过程 由RuBP开始至RuBP再生结束，共有14步反应，均在叶绿体的基质中进行。全过程分为羧化、还原、再生3个阶段。(1)羧化阶段(carboxylation phase) 指进入叶绿体的CO2与受体RuBP结合，并水解产生PGA的反应过程。以固定3分子CO2为例：3RuBP+3CO2+3H2O PGA + 6H+核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶(Rubisco)具有双重功能，既能使RuBP
经膜上的运转器(translocator)才能通过；蔗糖、C5`C7糖的二磷酸酯、NADP+、PPi等物质则不能通过。2.基质及内含物 被膜以内的基础物质称为基质(stroma)，基质以水为主体，内含多种离子、低分子的有机物，以及多种可溶性蛋白质等。基质是进行碳同化的场所，它含有还原CO2与合成淀粉的全部酶系，其中1，5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(ribulose1,5bisphosphate carboxylase/oxygenase,Rubisco)占基质总蛋白的一半以上。此外，基质中含有氨
低丰度蛋白的目的。它可以从人类的血清或血浆样品中去除 14 种高丰度蛋白。此外，Seppro?产品线还能覆盖对小鼠和大鼠样品的处理，以及从植物样品中去除二磷酸核酮糖羧化酶。该类解决方案能显著降低样品的复杂性，利于低丰度蛋白的下游检测。Western Blot 中的蛋白样品危机在 Western Blot 中如果蛋白样品制备不当，可能会造成无信号、弱信号、条带大小不正确等实验问题。下表就此类实验问题给出案例分析和解决方案，供参考。
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