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苹果酸合酶(MS)生化试剂盒

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  • XK-SJH-A820
  • 国产
  • 2025年07月13日
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      100

    • 英文名

      Malate Synthase (MS) Test Kit

    • CAS号

    • 保质期

      1年

    • 供应商

      上海晅科生物科技有限公司

    • 保存条件

      2-8℃

    • 规格

      50管/48样

    产品细节图片1

    苹果酸合酶(malate synthase,MS)试剂盒说明书

    可见分光光度法 50 /48

    正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义:

    苹果酸合酶MSEC 4.1.3.2是属于转移酶中酰基转移酶的一类,主要存在于植物和微生物中。MS 是乙醛酸循环的关键酶之一,在 MS 催化下乙醛酸与乙酰辅酶 A 反应生成苹果酸。测定原理:
    MS 催化乙酰 CoA 和乙醛酸产生苹果酸,同时生成辅酶 A,辅酶A 使无色的DTNB 转变成黄色的 TNB,在 412nm 处有特征吸光值。

    需自备的仪器和用品:

    分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰、和蒸馏水

    试剂组成和配制:

    试剂一:液体 100 mL×1 瓶,4℃保存; 试剂二:液体 25 mL×1 瓶,4℃保存;
    试剂三:粉剂×1 瓶,-20℃保存;临用前加入 25mL 试剂一充分溶解后使用,用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
    试剂四:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 6 mL 试剂一充分溶解后使用,用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;

    样本的前处理:

    1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量
    104 :试剂一体积(mL500~10001 的比例建议 500 万细菌或细胞加入 1mL试剂一,超声波破碎细菌或细胞冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 308000g 4离心 10min,取上清,置冰上待测。
    2、组织:按照组织质量(g:试剂一体积(mL)15~10 的比例建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一,进行冰浴匀浆,8000g 4离心 10min,取上清,置冰上待测。


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    产品细节图片2产品细节图片3

    测定步骤:

    1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 412nm,蒸馏水调零。
    2、样本测定
    1mL 玻璃比色皿中依次加入 100μL 样本、400μL 试剂二,400μL 试剂三和 100μL 剂四,混匀,立即记录 412 nm 处反应 5min 时的吸光值A1 10min 时的吸光值A2,计算ΔA=A2-A1
    MS 活性计算:
    1. 按样本蛋白浓度计算:
    单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1 nmol TNB 定义为一个酶活力单位。MSnmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反总÷ε×d×109]÷(V ×Cpr) ÷T=147×ΔA÷Cpr 此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
    1. 按样本鲜重计算:
    单位的定义:每g 组织每分钟催化产生 1 nmol TNB 定义为一个酶活力单位。
    MSnmol/min /g 鲜重=[ΔA×V 反总÷ε×d×109W ×V ÷V 样总÷T=147×ΔA÷W
    1. 按细菌或细胞密度计算:
     
    单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1 nmol TNB 定义为一个酶活力单位。MSnmol/min /104 cell=[ΔA×V 反总÷ε×d×109500×V ÷V 样总÷T=0.294×ΔA V 反总:反应体系总体积,1×10-3 LεTNB 摩尔消光系数,1.36×104 L / mol /cmd:比色光径,1 cmV 样:加入样本体积,0.1 mLV 样总:加入提取液体积,1 mLT:反应
    时间,5 minCpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样本质量,g500:细胞或细菌总数, 500 万。

    产品细节图片4

     

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