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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
100
- 英文名:
Malate Synthase (MS) Test Kit
- CAS号:
无
- 保质期:
1年
- 供应商:
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件:
2-8℃
- 规格:
50管/48样

苹果酸合酶(malate synthase,MS)试剂盒说明书
可见分光光度法 50 管/48 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义:
苹果酸合酶(MS,EC 4.1.3.2)是属于转移酶中酰基转移酶的一类,主要存在于植物和微生物中。MS 是乙醛酸循环的关键酶之一,在 MS 催化下乙醛酸与乙酰辅酶 A 反应生成苹果酸。测定原理:MS 催化乙酰 CoA 和乙醛酸产生苹果酸,同时生成辅酶 A,辅酶A 使无色的DTNB 转变成黄色的 TNB,在 412nm 处有特征吸光值。
需自备的仪器和用品:
分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰、和蒸馏水试剂组成和配制:
试剂一:液体 100 mL×1 瓶,4℃保存; 试剂二:液体 25 mL×1 瓶,4℃保存;试剂三:粉剂×1 瓶,-20℃保存;临用前加入 25mL 试剂一充分溶解后使用,用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
试剂四:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 6 mL 试剂一充分溶解后使用,用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
样本的前处理:
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一),进行冰浴匀浆,8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
相关图片:

测定步骤:
1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 412nm,蒸馏水调零。2、样本测定
在 1mL 玻璃比色皿中依次加入 100μL 样本、400μL 试剂二,400μL 试剂三和 100μL 试剂四,混匀,立即记录 412 nm 处反应 5min 时的吸光值A1 和 10min 时的吸光值A2,计算ΔA=A2-A1。
MS 活性计算:
- 按样本蛋白浓度计算:
- 按样本鲜重计算:
MS(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V 样÷V 样总)÷T=147×ΔA÷W
- 按细菌或细胞密度计算:
时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数, 500 万。
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文献和实验1. 催化特点 ① 高效性 ② 专一性 键专一、基团专一、绝对或几乎绝对专一 ③ 可调节性 酶浓度调节、激素调节、共价修饰调节、限制性蛋白酶的水解作用与酶活调节、抑制剂的调节、反馈调节、金属离子和其他小分子化合物的调节。 2. 影响酶活因素 ①. 酶活测定方式 测定酶活,必须了解酶催化反应总的反应式,而且分析程序必须能够测定底物的消失或产物的生产。还需考虑辅助因子、酶的最适pH值和最适温度。 ②. 酶联测定法 过氧化物酶和它的共底物或辅酶必须过量,使酶联测定不属于限速步骤。 ③ 酶
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