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- XK-SJH-A490
- 国产
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
33
- 英文名：
Cell wall insoluble acid invertase (B-AI) test kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8°C
- 规格：
100管/48样
细胞壁不溶性酸性转化酶（cell-wall binding acid invertase, B-AI）
试剂盒说明书
微量法 100 管/48 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：
蔗糖转化酶（Invertase，Ivr）催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。根据最适 pH，Ivr 分为酸性转化酶（AI）和中性转化酶（NI）两种类型。AI 的最适 pH 为 3～5。AI 分为可溶性 AI(S-AI)和细胞壁不溶性 AI（B-AI）两种类型。B-AI 存在于细胞间隙并结合在细胞壁上，主要参与韧皮部质外体卸载时蔗糖的分解，以维持库源之间蔗糖的浓度。
测定原理：
B-AI 催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与 3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在 510nm 有特征光吸收，在一定范围内 510nm 光吸收增加速率与 B-AI 活性成正比。自备用品：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液 1：液体 100mL×1 瓶，4℃保存; 提取液 2：液体 100mL×1 瓶，4℃保存; 试剂一：液体 20mL×1 瓶，4℃保存;试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 10mL 试剂一充分溶解备用；用不完的试剂 4℃ 保存;
试剂三：液体 15mL×1 瓶，4℃保存；
粗酶液提取：
按照组织质量（g）：提取液 1 体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL提取液 1），进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心 10min，弃上清，沉淀中加入 1mL 蒸馏水，充分震荡混匀，12000g 4℃离心 10min，弃上清，沉淀中加入 1mL 提取液 2 充分混匀，4℃浸提过夜，12000g 4℃离心 20min，取上清置冰上待测。测定步骤和加样表：
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 510nm，蒸馏水调零。2、样本测定，（在 EP 管中依次加入下列试剂）：
| 试剂名称（μL） | 测定管 | 对照管 |
| 样本 | 50 | 50 |
| 试剂一 | 200 | |
| 试剂二 | 200 |
| 试剂三 | 125 | 125 |
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B-AI 活性计算：
- 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
- 按蛋白浓度计算：
B-AI 活性（μg /min/mg prot）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=20.8×(ΔA +0.001)
÷Cpr
- 按鲜重计算：
B-AI 活性（μg /min /g 鲜重）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(W×V1÷V2) ÷T=20.8×(ΔA +0.001)
÷W
V1：加入反应体系中样本体积，0.05mL；V2：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，30min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。
- 用 96 孔板测定的计算公式如下
- 按蛋白浓度计算：
B-AI 活性（μg /min /mg prot）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=41.6×(ΔA +0.001)
÷Cpr
- 按鲜重计算：
B-AI 活性（μg /min /g 鲜重）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(W ×V1÷V2)=41.6×(ΔA +0.001) ÷W
V1：加入反应体系中样本体积，0.05mL；V2：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，30min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。
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