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- 2025年07月12日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
Phospholipase A2 (PLA2) test kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
100管/48样
磷脂酶 A2（phospholipase A2，PLA2）试剂盒
微量法 100T/48S
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
磷脂酶 A2（EC3.1.1.4）是磷脂 sn-2 位脂酰基水解酶，广泛存在于动植物组织、细菌、细胞核分泌物中，参与脂肪消化，精子成熟、细胞信号传递、脂质过氧化修复、宿主反应等生理过程，在控制体内磷脂类物质平衡、调节机体新陈代谢、参与疾病的病理进程等方面发挥着及其重要的作用。
测定原理
磷脂酶 A2 作用于 2-硫代十六酰乙基磷酸胆碱（HEPC）产生游离巯基，与DTNB 反应生成黄色物质，在 412nm 处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、超速冷冻离心机、研钵、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板。试剂组成和配制
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。试剂一：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。试剂二：液体 20mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体×5 瓶，-20℃避光保存。临用前根据用量每瓶加入 1.8mL 试剂二充分混匀；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
样品处理
1. 组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于 4℃，10000g 离心 5min，取全部上清于 4℃、100000g
离心 30min，弃上清，取沉淀溶于 1mL 试剂一。
2. 细胞：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后于 4℃，10000g 离心 5min，取全部上清于 4℃、100000g 离心 30min，弃上清，取沉淀溶于 1mL 试剂一。
3. 血清：直接测定。
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计算公式
- 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
- 按照蛋白浓度计算
PLA2 活性（nmol/min/mg prot）= △A÷（ ×d）×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T
-
- 按照样本质量计算
位。
PLA2 活性（nmol/min/g 鲜重）= △A÷（ ×d）×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）÷T
= 73.53×△A÷W
-
- 细胞数量计算
PLA2 活性（nmol/min/104 cell）= △A÷（ ×d）×V 反总÷（V 样×细胞数量÷V 样总）÷T
= 73.53×△A÷细胞数量
4 按照液体体积计算
酶活性定义：每毫升血清每分钟水解 HEPC 产生 1nmol 游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。
PLA2 活性（nmol/min/mL）= △A÷（ ×d）×V 反总÷V 样÷T
= 73.53×△A
：TNB 消光系数，13600L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 反总：反应总体积，1mL； V 样：反应体系中加入样本体积，0.1mL；W：样本质量，g；V 样总：加入提取液体积，1mL； T：反应时间，10min
- 用 96 孔板测定的计算公式如下
- 按照蛋白浓度计算
PLA2 活性（nmol/min/mg prot）= △A÷（ ×d）×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T
=147.06×△A÷Cpr
-
- 按照样本质量计算
PLA2 活性（nmol/min/g 鲜重）= △A÷（ ×d）×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）÷T
= 147.06×△A÷W
-
- 细胞数量计算
PLA2 活性（nmol/min/104 cell）= △A÷（ ×d）×V 反总÷（V 样×细胞数量÷V 样总）÷T
=147.06×△A÷细胞数量
4 按照液体体积计算
酶活性定义：每毫升血清每分钟水解 HEPC 产生 1nmol 游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。
PLA2 活性（nmol/min/mL）= △A÷（ ×d）×V 反总÷V 样÷T
= 147.06×△A
：TNB 消光系数，13600L/mol/cm；d：比色皿光径，0.5cm；V 反总：反应总体积，1mL； V 样：反应体系中加入样本体积，0.1mL；W：样本质量，g；V 样总：加入提取液体积，1mL； T：反应时间，10min
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文献和实验人抗磷脂酶A2抗体（Anti-PLA2R）酶联免疫分析（ELISA）
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抗磷脂酶A2受体抗体检测试剂——特发性膜性肾病特异性诊断指标
%的IMN患者具有肾病综合征，有时胳膊和眼皮出现严重水肿，体重减轻，排尿减少； ——约20%的患者具有蛋白尿，但是无其他任何症状。尿沉渣检查常见脂肪粒，滴或管； ——约50% IMN患者具有显微镜血尿，蛋白尿与糖尿； ——约70%患者在发病初期血压与肾功能正常。发病机制 2009年首次描述了IMN的自身免疫机制，其实是自身抗体与磷脂酶A2受体（PLA2R，跨膜糖蛋白）反应的结果。PLA2R是在人肾小球足细胞表面表达，他们参与调节细胞中磷脂酶的结合过程。目前PLA2R主要分为两型（M型与N
linxi2003 有人做过PGE2合成通路的吗？毫无疑问，首先磷脂酶A2 (PLA2)催化细胞膜磷脂生成花生四烯酸(AA)；其次AA在环氧合酶(主要是COX2)的作用下转化为不稳定的前列腺素H2( PGH2)；最后由前列腺素E合酶（主要是mPGES1）将PGH2异构化为PGE2。试想一想，磷脂在细胞膜上，生成花生四烯酸也是细胞膜上，生成后就被释放出去了，而COX2和mPGES1主要存在细胞核的膜上，这个通路怎么能说得通呢。有哪位高手给个建议?发表一下意见
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