- ￥630
- Xkbio
- XK-SJH-A523
- 国产
- 2025年07月18日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
Chitinase Assay Kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8°C
- 规格：
50管/24样
几丁质酶（Chitinase）试剂盒
分光光度法 50T/24S
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。测定意义：
几丁质主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨)， 以及真菌类的细胞壁中。而几丁质酶(EC 3.2.1.14)可催化几丁质水解，具有抵御真菌侵染的作用，成为抗真菌病害的研究热点。测定原理：
几丁质酶水解几丁质产生 N-乙酰氨基葡萄糖，进一步与 DNS 试剂反应产生棕红色化合物， 在 540nm 处有特征吸收峰，吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。自备实验用品及仪器
天平、水浴锅、离心机、分光光度计、1mL 玻璃比色皿、蒸馏水。试剂组成和配制：
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。试剂一：液体 12mL×1 瓶，4℃保存。试剂二：液体 30mL×1 瓶，4℃避光保存。
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粗酶液提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 20min，取上清，置冰上待测。2. 真菌：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 20min，取上清置于冰上待测。
3. 培养液：直接测定。
测定操作表：
| 对照管 | 测定管 | |
| 粗酶液（µL） | 400 | 400 |
| 提取液（µL） | 600 | 200 |
| 试剂一（µL） | 400 | |
| 混匀，37℃水浴 1h。沸水浴 5min 终止反应，冷却后 8000rpm，4℃，离心 10min，取上清， 蒸馏水稀释 10 倍待用 |
||
| 上清 | 700 | 700 |
| 试剂二（µL） | 500 | 500 |
| 混匀，95℃水浴 5min，室温冷却。吸取 1000µL 至 1mL 玻璃比色皿，测定 540nm 下吸光值 A 测定与 A 对照，ΔA=A 测定-A 对照。 |
||
标准条件下测定回归方程为 y = 6.4108x - 0.2753，R2 = 0.9984；x 为标准品浓度（mg/mL），
y 为吸光值。
1、 按照样本重量计算
酶活性定义：37℃条件下，每克组织每小时分解几丁质产生 1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。
几丁质酶活性（mg/h/g 鲜重）=（ΔA+ 0.2753）÷6.4108×V 反总÷(V 样÷V 样总×W) ÷T×10
= 3.899×（ΔA+ 0.2753）÷W
2、 按照蛋白质浓度计算
几丁质酶活性（mg/h mg prot）=（ΔA+ 0.2753）÷6.4108×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T×10
= 3.899×（ΔA+ 0.2753）÷Cpr
3、 按细胞数量计算
酶活定义：37℃条件下，每 104 个细胞每小时分解几丁质产生 1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活单位。
几丁质酶活性（mg/h /104 cell）=（ΔA+ 0.2753）÷6.4108×V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量)×10
= 3.899×（ΔA+ 0.2753）÷细胞数量
4、按液体体积计算
酶活定义：37℃条件下，每毫升培养液每小时分解几丁质产生 1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活单位。
几丁质酶活性（mg/h /mL）=（ΔA+ 0.2753）÷6.4108×V 反总÷V 样×10
= 3.899×（ΔA+ 0.2753）
V 反总：反应体系总体积，1 mL；V 样：反应体系中样本体积，0.4mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；10，稀释倍数。
注意事项：
1、 如果吸光值超过 4，说明样本中还原糖含量较高，需要额外稀释，并在最后结果中乘以相应倍数。
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文献和实验一、检测原理 Caspase (Cysteine-requiring Aspartate Protease)是在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中，没有活性；在细胞发生凋亡阶段，Caspase被激活，活化的Caspase可裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。 Caspase分光光度法检测试剂盒的原理是将Caspase序列特异性的多肽偶联至黄色发光基团pNA (p-nitroaniline)。当该底物被活化的Caspase剪切后，黄色
(7)式或(9)式可计算叶绿素总量。 叶绿体色素的提取液中除含有叶绿素a与b外，还含有叶黄素和胡萝卜素，因为叶黄素和胡萝卜素的吸收光谱均在蓝光区，故不会干扰叶绿素含量在红光区的分光光度法测定。 器材与试剂 722分光光度计，叶绿体色素提取所需器材。 方法与步骤 1. 提取叶绿素。 2. 测定光密度。 在1cm比色杯中，注入叶绿素提取液(浓度大时需稀释)。另以叶绿素提取介质作为参比溶液注入同样的比色杯中。根据实验要求，选用相应的波长(测总量选用652nm，测叶绿素a、b含量
度。 （2） 吸收系数法 按各品种项下的方法配制供试品溶液，在规定的波长处测定其吸收度，再以该品种在规定条件下的吸收系数计算含量。用本法测定时，应注意仪器的校正和检定。 （3） 计算分光光度法 采用计算分光光度法应慎重。本法有多种，使用时均应按各品种项下规定的方法进行。当吸收度处在吸收曲线的陡然上升或下降的部位测定时，影响精度的因素较多，故对照品和供试品测试条件应尽可能一致。若测定时不用对照品，如维生素A测定法，则应在测定时对仪器作仔细的校正和检定。
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