游离脂肪酸含量测试盒-测植物组织

游离脂肪酸（FFA）含量试剂盒（测植物组织）

微量法 100T/48S

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

FFA 既是脂肪水解的产物，又是脂肪合成的底物。FFA 的浓度与脂类代谢、糖代谢、内分泌功能有关，也可反映食物贮藏中的品质变化。

测定原理：

在弱酸性条件下，FFA 与铜盐反应生成铜皂，在 715nm 处有特征吸收峰，在一定范围内游离脂肪酸含量与显色程度呈线性关系。

自备仪器和用品：

研钵、台式离心机、震荡仪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板。试剂组成和配制：
试剂一：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。试剂二：液体 20mL×1 瓶，4℃保存。试剂三：液体 20mL×1 瓶，4℃保存。样品中 FFA 提取：
组织用蒸馏水冲洗干净后，用吸水纸吸取表面水分，捣碎后按照组织质量（g）：提取液体积 (mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一）加入试剂一，震荡提取3h，8000g，4℃离心 10min，取上清液待测。

测定操作：

1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min，调节波长到 715 nm。
2. 对照管：取上清液 0.4mL，加 0.2mL 试剂二，充分震荡 5min，室温静置 5min，取上层200μL 于微量石英比色皿/96 孔板，调零。
3. 测定管：取上清液 0.4mL，加 0.2mL 试剂三，充分震荡 5min，室温静置 5min，取上层200μL 于微量石英比色皿/96 孔板，测定吸光值，记为 A。

相关图片：

FFA 含量计算：

1. 1. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下标准曲线：y=0.0075 x+ 0.0055，R2=0.994
1. 按样本蛋白浓度计算

FFA（nmol/mg prot）= (A-0.0055)÷0.0075×V 1÷(V1×Cpr)=133×(A-0.0055)÷Cpr

2. 按样本质量计算

FFA（nmol/g 鲜重）= (A-0.0055)÷0.0075×V 1÷(V1÷V2×W)=133×(A-0.0055)÷W
V1：加入样本体积，0.4mL；V2：提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W： 样品质量，g。

1. 2. 使用 96 孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y=0.0038 x+ 0.0055，R2=0.994

1. 按样本蛋白浓度计算

FFA（nmol/mg prot）= (A-0.0055)÷0.0038×V 1÷(V1×Cpr)=266×(A-0.0055)÷Cpr

2. 按样本质量计算

FFA（nmol/g 鲜重）= (A-0.0055)÷0.0038×V 1÷(V1÷V2×W)=266×(A-0.0055)÷W
V1：加入样本体积，0.4mL；V2：提取液体积，1mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W： 样品质量，g。