游离脂肪酸FFA含量试剂盒（测植物组织）

游离脂肪酸FFA含量试剂盒（测植物组织）    
分光光度法 
注    意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：
FFA既是脂肪水解的产物，又是脂肪合成的底物。FFA的浓度与脂类代谢、糖代谢、内分泌功能有关，也可反映食物贮藏中的品质变化。

测定原理：
在弱酸性条件下，FFA与铜盐反应生成铜皂，在715nm处有特征吸收峰，在一定范围内游离脂肪酸含量与显色程度呈线性关系。

自备仪器和用品：
研钵、台式离心机、震荡仪、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿。



试剂组成和配制：
试剂一：液体60mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体25mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体25mL×1瓶，4℃保存。

样品中FFA提取：
组织用蒸馏水冲洗干净后，用吸水纸吸取表面水分，捣碎后按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~12的比例（建议称取约0.1g组织，加入1.2mL试剂一）加入试剂一，震荡提取3h，8000g，4℃离心10min，取上清液待测。

测定操作：
1. 分光光度计预热30 min，调节波长到715 nm。
2. 对照管：取上清液1mL，加0.5mL试剂二，充分震荡5min，室温静置5min，取上层0.8mL于1mL玻璃比色皿，调零。
3. 测定管：取上清液1mL，加0.5mL试剂三，充分震荡5min，室温静置5min，取上层0.8mL于1mL玻璃比色皿，测定吸光值，记为A。
注意：对照管每个样品都需要测定一次。

游离脂肪酸FFA含量试剂盒（测植物组织）    
FFA含量计算公式：
标准曲线：y=0.0075 x+ 0.0055，R2=0.994
（1）按样本蛋白浓度计算
FFA（nmol/mg prot）= (A-0.0055)÷0.0075×V1÷(V1×Cpr)=133×(A-0.0055)÷Cpr
（2）按样本质量计算
FFA（nmol/g 鲜重）= (A-0.0055)÷0.0075×V1÷(V1÷V2×W)=160×(A-0.0055)÷W
V1：加入样本体积，1mL；V2：提取液体积，1.2mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g。

注意事项：
1.蛋白含量不可直接用提取的上清液直接测定，可用蒸馏水或缓冲液或生理盐水选用本公司的BCA法蛋白含量测定试剂盒。
2.低检出限为2 nmol/mL。