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- Xkbio
- XK-SJH-A394
- 国产
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
Triose Phosphate Isomerase (TPI) Test Kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
100管/96样
磷酸丙糖异构酶（Triose-phosphate isomerase，TPI） 试剂盒
微量法 100T/96S
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。测定意义
植物叶绿体中磷酸丙糖异构酶是光合作用中参与 calvin 循环的重要酶。作用于磷酸甘油醛和磷酸二羟bing酮之间的转化，磷酸二羟bing酮能快速透过叶绿体的包膜进入细胞质，并在其中逐步转化为蔗糖。测定原理
磷酸丙糖异构酶将磷酸二羟bing酮转化为 3-磷酸甘油醛，3-磷酸甘油醛与 NAD 在 3-磷酸甘油醛脱氢酶的作用下生成 3-磷酸甘油酸和 NADH，340nm 处的吸光度变化反映了磷酸丙糖异构酶的活性的高低。
自备实验用品及仪器
天平、低温离心机、研钵、震荡仪、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板。试剂组成和配制
提取液一：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。提取液二：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。试剂一：液体 12mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 2mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后
-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂三：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 2 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂四：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 2 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
酶液提取
①总 TPI 酶提取：建议称取约 0.1g 样本，加入 1mL 提取液一，冰浴匀浆后超声破碎（冰浴，200W，破碎 3s，间歇 7s，总时间 1min），然后 4℃，8000g 离心 10min，取上清测定。
②胞浆和叶绿体 TPI 酶的分离：按照植物组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5～10 的比例（建议称取约 0.1g 样本，加入 1mL 提取液一），冰浴匀浆后于 4℃，200g 离心 5min，弃沉淀，取上清在 4℃，8000g 离心 10min，取上清用于测定胞浆 TPI 酶活性，取沉淀加 1mL 提取液二，震荡溶解后超声破碎（冰浴，200W，破碎 3s，间歇 7s，总时间 1min），然后 4℃， 8000g 离心 10min，取上清测定叶绿体中 TPI 酶活性。
建议测定总 TPI 酶活性，按照步骤①提取粗酶液，若需要分别测定胞浆和叶绿体中的 TPI， 则按照步骤②提取粗酶液。
测定操作
- 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
- 取微量石英比色皿/96 孔板，依次加入 120μL 试剂一，20μL 试剂二，20μL 试剂三，20μL 试剂四，20μL 粗酶液，充分混匀，记录 340nm 处 10s 的吸光值 A1 和 310s 的吸光值 A2，
相关图片：
计算公式
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- 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
- 按照样本蛋白浓度计算
TPI（nmol/min/mg prot）= ΔA÷（ε×d）×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr
- 按照样本质量计算
TPI（nmol/min/g 鲜重）= ΔA÷（ε×d）×V 反总÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=321.54×ΔA÷W
V 反总：反应体系总体积，0.2mL；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.02mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g
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- 用 96 孔板测定的计算公式如下
- 按照样本蛋白浓度计算
TPI（nmol/min/mg prot）= ΔA÷（ε×d）×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T= 643.08×ΔA÷Cpr
- 按照样本质量计算
TPI（nmol/min/g 鲜重）= ΔA÷（ε×d）×V 反总÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T= 643.08×ΔA÷W
V 反总：反应体系总体积，0.2mL；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.02mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T： 反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g
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文献和实验磷酸丙糖异构酶 triose phosphate isomerase， phosphotriose isomerase
催化 3- 磷酸 D- 甘油醛和磷酸二羟丙酮间互相转变的酶。 EC 5． 3． 1． 1．已知在肌肉、酵母，豌豆的种子里广泛存在，特别是可从肌肉中提纯。在糖酵解和酒精发酵的过程中，能把经醛缩酶生成的二羟丙酮磷酸转变为 3- 磷酸 D- 甘油醛。此外还在 6-磷酸葡萄糖的氧化系统（戊糖磷酸支路）中和光合成还原型戊糖磷酸循环中起着重要的作用。此反应的平衡极端地偏向于磷酸二羟丙酮一侧（平衡常数： 22）。又这种酶通常比醛缩酶要多，因此在醛缩酶的初期粗制品中，混有丙糖磷酸异构酶
亦称为三碳糖磷酸，是 3-磷酸甘油醛和二羟丙酮（ dihydroxyacetone）磷酸的平衡混合物。 磷酸丙糖异构酶参与此平衡反应。在糖酵解的过程中，由 1， 6- 二磷酸果糖经醛缩酶（ aldolase）的作用解裂生成，通过 3- 磷酸甘油醛 - 脱氢酶（ dehyd－ rogenase）能可逆的被磷酸化和氧化而产生 1， 3－二磷酸甘油酸。也可以作为光合成过程（还原型戊糖磷酸循环）的中间产物而生成。
磷酸二羟丙酮 dihydroxyacetone phosphate
磷酸丙糖之一。又称磷酸二氧丙酮。在醛缩酶的作用下，由 1， 6-二磷酸果糖开裂形成。通过磷酸丙糖异构酶的作用、和 3-磷酸甘油醛相互转化而进入糖酵解途径。并被细胞质的 NAD有关的磷酸甘油脱氢酶所还原，而成为 3- 磷酸甘油。
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