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- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
Tanninase (TAN) Kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
100管/48样
单宁酶（Tannase，TAN）试剂盒
微量法 100 管/48 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定.
测定意义
单宁酶全称是单宁酯酰水解酶(Tannase，EC 3.1.1.20)，它可以水解没食子酸单宁中的酯键和缩酚羧键，生成没食子酸和葡萄糖。
测定原理
使用抗氧化剂没食子酸丙酯（PG）作为单宁酶酶促反应的底物，在 270nn 下测定底物 PG反应前后的光密度变化,计算单宁酶酶活力。
需自备的的仪器和用品
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔 UV板、研钵、冰、蒸馏水
试剂的组成和配制
试剂一：液体 100mL×2 瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1 支，4℃保存；临用前每支加入 6mL 试剂一，充分溶解后备用；用不完的试剂 4℃保存；
粗酶液提取
按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL试剂一），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。液体样本：直接取上清测定。
测定步骤
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长到 270 nm，蒸馏水调零。2、加样表
| 试剂名称（μL） | 对照管 | 测定管 |
| 95℃水浴 5min 后灭活的粗酶液 | 50 | |
| 粗酶液 | 50 | |
| 试剂二 | 50 | 50 |
| 试剂一 | 900 | 900 |
注意：
1、 可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液，然后集中进行 5min 95℃沸水浴处理。
2、 务必使用 96 孔 UV 板（非普通酶标板，普通酶标板只能透过可见光，不能透过紫外光， 检测波长小于 340nm 务必使用 UV 板）。
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TAN 活力单位的计算
- 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
为吸光值。
1、按样本体积计算
单位的定义：40℃下每毫升粗酶液每分钟水解减少 0.01µmol 底物 PG 所需要的酶量定义为
TAN 活性(µmol/min/mL)=(ΔA-0.0044）÷0.0058÷1000×V 反总÷0.01÷V 样÷T
=34.48×( ΔA-0.0044）
2、按照蛋白浓度计算
单位的定义：40℃下每毫克蛋白每分钟水解减少 0.01µmol 底物 PG 所需要的酶量定义为一个酶活单位(U)。
TAN 活性((µmol/min/mg prot)=(ΔA-0.0044）÷0.0058÷1000×V 反总÷0.01÷(V 样×Cpr)÷T
=34.48×(ΔA-0.0044）÷Cpr
3、按照样本鲜重计算
单位的定义：40℃下每克样品每分钟水解减少 0.01µmol 底物 PG 所需要的酶量定义为一个酶活单位(U)。
TAN 活性(µmol/min/g 鲜重)=(ΔA-0.0044）÷0.0058÷1000×V 反总÷0.01÷(V 样÷V 样总×W)÷T
=34.48×(ΔA-0.0044）÷W
V 反总：反应体系总体积，1mL； V 样：加入样本体积，0.05mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，10min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
- 用 96 孔板测定的计算公式如下
为吸光值。
1、按样本体积计算
单位的定义：40℃下每毫升粗酶液每分钟水解减少 0.01µmol 底物 PG 所需要的酶量定义为一个酶活单位(U)。
TAN 活性(µmol/min/mL)=(ΔA-0.0044）÷0.0029÷1000×V 反总÷0.01÷V 样÷T
=68.97×( ΔA-0.0044）
2、按照蛋白浓度计算
单位的定义：40℃下每毫克蛋白每分钟水解减少 1µmol 底物 PG 所需要的酶量定义为一个酶活单位(U)。
TAN 活性(µmol/min/mg prot)=(ΔA-0.0044）÷0.0029÷1000×V 反总÷0.01÷(V 样×Cpr)÷T
=68.97×( ΔA-0.0044）÷Cpr
3、按照样本鲜重计算
单位的定义：40℃下每克样品每分钟水解减少 0.01µmol 底物 PG 所需要的酶量定义为一个酶活单位(U)。
TAN 活性(µmol/min/g 鲜重)=(ΔA-0.0044）÷0.0029÷1000×V 反总÷0.01÷(V 样÷V 样总×W)÷T
=68.97×( ΔA-0.0044）÷W
V 反总：反应体系总体积，1mL； V 样：加入样本体积，0.05mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，10min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
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文献和实验相关实验
检测，使分子信标与DNA变性部分结合，从而出现荧光。 4.4 用于蛋白质的检测 随着基因组学的发展，出现了蛋白质组学，人们越来越发现许多问题要到蛋白质中去寻找答案。这就要求人们能够对蛋白质各方面的性质可以加以检测。此外，人们把蛋白质和核酸联系起来，研究蛋白质和核酸之间的相互作用，这一课题已成为现代分子生物学的研究热点之一。与传统的蛋白质研究方法（如X单晶衍射、圆二色谱等技术）相比，分子信标技术具有简单、灵敏的特点，又可以实现实时检测，甚至可以用于活体检测。 2001年，Tan等发表文章阐述了其应用
技术资料单宁酶（TAN）试剂盒
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