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69
- 英文名:
Lactate dehydrogenase (LDH) test kit
- CAS号:
无
- 保质期:
1年
- 供应商:
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件:
2-8℃
- 规格:
100管/48样

乳酸脱氢酶(Lactate Dehydrogenase,LDH)试剂盒
微量法 100 管/48 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
LDH(EC 1.1.1.27)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是糖酵解途径的末端酶, 催化bing酮酸与乳酸之间的可逆反应,伴随着 NAD+/NADH 之间互变。
测定原理:
LDH 催化 NAD+氧化乳酸生成bing酮酸,bing酮酸进一步与 2, 4 - 二硝基ben肼作用生成bing酮酸二硝基ben腙,在碱性溶液中显棕红色,颜色深浅与bing酮酸浓度成正比。需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。试剂的组成和配制:
提取液:60mL×1 瓶, 4℃保存;试剂一:液体 5 mL×1 瓶, 4℃保存;
试剂二:粉剂×1 支,-20℃保存,用时加入 10μL 试剂五和 1.3 mL 蒸馏水充分溶解备用,用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融;
试剂三:液体 5 mL×1 瓶,4℃保存; 试剂四:液体 20 mL×1 瓶,4℃保存; 试剂五:液体 100μL×1 支,4℃保存; 样品测定的准备:
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量
(104 个):提取液体积(mL)为 1000~5000:1 的比例(建议 2000 万细菌或细胞加入 1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。
测定步骤:
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 450nm,蒸馏水调零。2、样本测定(在 EP 管中加入下列试剂)
| 试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 |
| 样本 | 10 | 10 |
| 试剂一 | 50 | 50 |
| 试剂二 | 10 | |
| 蒸馏水 | 10 |
| 试剂三 | 50 | 50 |
|
150
|
|
150
|
|
试剂四
|
相关图片:

LDH 活力单位的计算:
- 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
ΔA)。
2、血清(浆)LDH 活力的计算
单位的定义:每 mL 血清(浆)每分钟催化产生 1nmol bing酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH(nmol/min/mL)=(ΔA-0.0037)÷0.9108÷T×103=73.2×ΔA
3、细胞、细菌和组织中 LDH 活力的计算
- 按样本蛋白浓度计算:
- 按样本鲜重计算:
LDH(nmol/min/g 鲜重)=[(ΔA-0.0037)÷0.9108×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =73.2×ΔA÷W
- 按细菌或细胞密度计算:
LDH(nmol/min/104 cell)= [(ΔA-0.0037)÷0.9108×V1]÷(2000×V1÷V2)÷T×103 =0.037×ΔA
V1:加入反应体系中样本体积,0.01mL;V2:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,15 min; Cpr:蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;2000:细胞或细菌总数,2000 万;103:1umol/mL=103 nmol/mL。
- 使用 96 孔板测定的计算公式如下:
2、血清(浆)LDH 活力的计算
单位的定义:每 mL 血清(浆)每分钟催化产生 1nmol bing酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH(nmol/min/mL)=(ΔA-0.0037)÷0.4554÷T×103=146.4×(ΔA-0.0037)
3、细胞、细菌和组织中 LDH 活力的计算
- 按样本蛋白浓度计算:
÷Cpr
ΔA-0.0037)÷0.4554×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103 =146.4×(ΔA-0.0037)
- 按样本鲜重计算:
LDH ( nmol/min/g 鲜 重 ) =[ ( ΔA-0.0037 ) ÷0.4554×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =146.4×
(ΔA-0.0037)÷W
- 按细菌或细胞密度计算:
LDH( nmol/min/104 cell) = [( ΔA-0.0037 ) ÷0.4554×V1]÷(2000×V1÷V2)÷T×103 =0.073×
1、 标准曲线线性范围为:0.1 umol/mL -2 umol/mL。
2、 ΔA 线性范围为:0.01 -1。
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1)测定方法 1.用含5%小牛血清的RPMI-1640培养液将靶细胞调整到5×104~2×105/ml,此浓度需根据情况预先标定。 2.在96孔圆底细胞培养板中加入靶细胞,每孔加100μl。3个效应细胞自然释放对照孔不加靶细胞,只加100μl培养液。 3.向各孔加100μl效应细胞,效应细胞与靶
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