- ￥3980
- Xkbio
- XK-SJH-A387
- 国产
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
33
- 英文名：
Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
50管/48样
3-磷酸甘油醛脱氢酶(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase， GAPDH)试剂盒
分光光度法 50 管/48 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义
GAPDH 催化 3-磷酸甘油醛氧化生成 1,3-二磷酸甘油酸，是糖酵解途径的关键酶，与糖异生途径、体内血糖浓度的维持和糖尿病的发生密切相关，在机体糖、脂、蛋白代谢紊乱疾病中发挥重要作用。
测定原理
3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和 ATP 生成 1,3 二磷酸甘油酸。GAPDH 逆向催化 1,3 二磷酸甘油酸和 NADH 生成 3 磷酸甘油醛、无机磷和 NAD，340nm 处测定 NADH 的减少量可反映GADPH 活性的高低。需自备的仪器和用品
分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。试剂的组成和配制
提取液一：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。提取液二：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。试剂一：粉剂×1 瓶，-20℃保存；试剂二：液体 50mL×1 瓶，4℃保存； 试剂三：液体 28μL×1 支，4℃保存； 组织样本的前处理
①总 GAPDH 酶提取：建议称取约 0.1g 样本，加入 1mL 提取液一，冰浴匀浆后超声破碎（冰
浴，200W，破碎 3s，间歇 7s，总时间 1min），然后 4℃，8000g 离心 10min，取上清测定。
②胞浆和叶绿体 GAPDH 酶的分离：按照植物组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5～10的比例（建议称取约 0.1g 样本，加入 1mL 提取液一），冰浴匀浆后于 4℃，200g 离心 5min，弃沉淀，取上清在 4℃，8000g 离心 10min，取上清用于测定胞浆 GAPDH 酶活性，取沉淀加 1mL 提取液二，震荡溶解后超声破碎（冰浴，200W，破碎 3s，间歇 7s，总时间 1min），然后 4℃，8000g 离心 10min，取上清测定叶绿体中 GAPDH 酶活性。
建议测定总 GAPDH 酶活性，按照步骤①提取粗酶液，若需要分别测定胞浆和叶绿体中的
GAPDH，则按照步骤②提取粗酶液。
细菌或培养细胞的前处理
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。测定步骤
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。2、 样本测定
- 工作液的配制：将试剂二全部倒入试剂一瓶中，充分溶解，37℃(哺乳动物)或 25℃( 其它物种)预热 10 分钟；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
- 在试剂三中加入 1mL 蒸馏水，充分混匀待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
- 在 1mL 石英比色皿中加入 30μL 样本、20μL 试剂三和 950μL 工作液，混匀，加入最后一个试剂的同时开始计时，记录 340nm 处 20s 时的吸光值 A1 和 5min20s 后的吸光值A2，计算 ΔA=A1-A2。
相关图片：
GAPDH 活性计算
- 按样本蛋白浓度计算
GAPDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=1072×ΔA÷Cpr
- 按样本鲜重计算
GAPDH（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=1072×ΔA÷W
- 按细菌或细胞密度计算
GAPDH（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(500 ×V 样÷V 样总) ÷T=2.144×ΔA
V 反总：反应体系总体积，1×10-3 L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d： 比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.03 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T： 反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。
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文献和实验问：求3-磷酸甘油醛脱氢酶测定方法及材料，感谢！ 答：楼上说的就是GAPDH，主要用来做内参的，我现在就是用这个 做内参，你可以上网找这方面的信息，就是在结合二抗的时候按照一定的比例加到二抗里面，一起结合，效果很好。
GAPDH抗体|GAPDH抗体大全-艾美捷指导您购买合适的GAPDH抗体
等也是最常见的内参抗体 。GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）是参与糖酵解的一种关键酶，由4个30-40kDa的亚基组成，分子量146kDa，检测条带大约在36kDa。GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达，广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参。 选择合适的GAPDH抗体显得尤为重要，首先GAPDH的WB检测条带大约为36kDa，因此对于一些待检测分子量大于40kDa或者小于30kDa的目的蛋白尤为合适。一般来说，国产的抗体在质量稳定性、效价等方面存在不足
【信息】Rabbit anti-GAPDH(SF-PA005)（兔抗 GAPDH 多克隆 IgG 抗体）招代理
Rabbit anti-GAPDH(SF-PA005)（兔抗 GAPDH 多克隆 IgG 抗体） 背景 甘油醛 -3- 磷 酸脱氢酶（ Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）是糖酵解（glycolysis）过程中的关键酶，分子量为37kDa 左右。它催化甘油醛-3-磷酸的氧化磷酸化反应。GAPDH 作为看家基因 在同种细胞 或者组织中一般是恒定、高水平表达的，常用作 Western Blot 实验的内参照. 来源 兔抗
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