- ￥630
- Xkbio
- XK-SJH-A346
- 国产
- 2025年07月09日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
33
- 英文名：
Transhydrogenase-2 kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
50管/48样
线粒体转氢酶-2（TH-2）试剂盒
分光光度法 50 管/48 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义
TH 位于线粒体的内膜上，又称为线粒体复合体六，催化 NADH+NADP+和 NAD++NADPH 相互转化，调节线粒体 NAD(H)和NADP(H)平衡。把逆向反应称为 TH-2，催化 NADPH 和NAD+生成 NADP+和 NADH。测定原理
NADH 和 NADPH 均在 340nm 有特征吸收，因此 TH 催化的转氢反应不能导致 340nm 吸光度发生变化。用人工合成底物 3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸（APAD+）替代 NAD+，TH-2 催化 APAD+还原生成 APADH，APADH 在 375nm 有特征光吸收，测定 375nm 光吸收的增加速率，来计算 TH-2 活性。需自备的仪器和用品
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。试剂的组成和配制
试剂一：液体 50mL×1 瓶，-20℃保存； 试剂二：液体 25mL×1 瓶，-20℃保存； 试剂三：液体 25mL×2 瓶，4℃保存； 试剂四：粉剂×2 支，-20℃保存；试剂五：粉剂×2 支，-20℃保存；
样本的前处理：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：① 准确称取 0.1g 组织或收集 500 万细菌或细胞，加入 1mL 试剂一，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
② 将匀浆 600g，4℃离心 5min。
③ 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11100g，4℃离心 10min。
④ 上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白，可用于测定从线粒体泄漏的 TH-2（此步可选做）。
⑤ 步骤④中的沉淀即为线粒体，加入 500uL 试剂二，超声波破碎（冰浴，功率 20％或 200W， 超声 3s，间隔 10 秒，重复 30 次），用于 TH-2 活性测定。
测定步骤：
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 375nm，蒸馏水调零。2、 样本测定
- 工作液的配制：临用前取试剂三、试剂四和试剂五各一支，将试剂四、五转移到试剂三中混合溶解，置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 5min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
- 在 1mL 玻璃比色皿中加入 100μL 样本和 1000μL 工作液，混匀，立即记录 375nm 处初始吸光值 A1 和 10min 后的吸光值 A2，计算 ΔA=A2-A1。
TH-2 活性计算
- 按样本蛋白浓度计算
TH-2 活性（nmol/min /mg prot）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr)÷T=164×ΔA÷Cpr
- 按样本鲜重计算
TH-2 活性（nmol/min/g 鲜重）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T=82×ΔA÷W
- 按细菌或细胞密度计算
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文献和实验度。 （2） 吸收系数法 按各品种项下的方法配制供试品溶液，在规定的波长处测定其吸收度，再以该品种在规定条件下的吸收系数计算含量。用本法测定时，应注意仪器的校正和检定。 （3） 计算分光光度法 采用计算分光光度法应慎重。本法有多种，使用时均应按各品种项下规定的方法进行。当吸收度处在吸收曲线的陡然上升或下降的部位测定时，影响精度的因素较多，故对照品和供试品测试条件应尽可能一致。若测定时不用对照品，如维生素A测定法，则应在测定时对仪器作仔细的校正和检定。
【 实验目的 】 学习紫外分光光度法测定核酸含量的原理和操作方法 【 实验原理 】 核酸、核苷酸及其衍生物都具有共轭双键系统，能吸收紫外光，RNA和DNA的紫外吸收峰在260nm波长处。一般在260nm波长下，每1ml含1µg RNA溶液的光吸收值为0.022~0.024，每1m1含1µg DNA溶液的光吸收值约为0.020，故测定未知浓度RNA或DNA
同时测定OD260nm，与OD280nm。，然后根据两种波长的吸收度的比值，通过经验公式校正，以消除核酸的影响而推算出蛋白质的真实含量。本法操作简便迅速，且不消耗样品(可以回收)，多用于纯化之蛋白质的微量测定。主要缺点：当待测的蛋白质与标准蛋白质中的酪氨酸和色氨酸含量差异较大时，则产生—定误差，混有核酸时必须分别测定280nm和260nm两处的OD值，再按公式推算蛋白质含量。[操作]取试管7支,各管混匀，盛于石英杯中，用紫外分光光度计，以空白管调节零点，分别于280nm、260nm波长下测定各管光密
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