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- XK-SJH-A328
- 国产
- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
33
- 英文名：
Carboxylesterase (CarE) Test Kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
50管/48样
羧酸酯酶（carboxylesterase，CarE）活性测定试剂盒
分光光度法 50 管/48 样
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。测定意义：
哺乳动物 CarE，也称脂族酯酶（aliesterase），广泛分布于组织和器官，属于丝氨酸水解酶家族。CarE 催化含酯键、酰胺键和硫酯键的内源性与外源性物质水解，但不能催化水解乙酰胆碱及其类似物。CarE 参与脂质运输和代谢，并且与多种药物、环境毒物以及致癌物的解毒和代谢有关，有机磷农药可结合并且抑制 CarE 活性。
测定原理：
CarE 能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯，固蓝显色；在 450 nm 光吸收增加速率，计算 CarE 活性。自备仪器和用品：
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。试剂组成和配制：
试剂一：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。试剂二：液体 30mL×2 瓶， 4℃保存；试剂三：粉剂×2 支， 4℃保存，临用前取 1 支试剂三，加 1.2ml 无水乙醇充分溶解； 试剂四：粉剂×2 支，-20℃保存，临用前取 1 支试剂四，加少量试剂二溶解；
工作液配制：临用前配制，向 1 瓶试剂二中，加入溶解后的试剂三和试剂四各 1 支，充分溶
解，过滤，4℃避光保存，可用 1 周。
样本的前处理：
1、细菌、细胞样品制备
收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 200 万细菌或细胞加入 400μL 试剂一， 超声波破碎细菌或细胞（功率 20％，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；12000g 4℃离心 30min，取上清液待测。
2、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆；12000g 4℃离心 30min，取上清液待测。
3、液体：直接测定。
测定步骤：
- 分光光度计预热 30min，调节波长到 450 nm，蒸馏水调零。
- 试剂二置于 37℃水浴中预热 30 min。
- 空白管：取 1mL 玻璃比色皿，依次加入 5μL 蒸馏水和 1000μL 试剂二，迅速混匀，于 450nm
- 测定管：取 1mL 玻璃比色皿，依次加入 5μL 上清液和 1000μL 试剂二，迅速混匀，于 450nm 处测定3min内吸光值变化，第10s 吸光值记为A3，第190s 吸光值记为A4。△A 测定管=A4-A3注意：空白管只需测定一次。
CarE 活性计算公式：
- 组织中 CarE 活性
- 按照蛋白浓度计算
= 67×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr
Cpr：蛋白质浓度，mg/mL；V 样：加入上清液体积，0.005 mL；T：反应时间，3min。V 反总：1.005mL；蛋白质浓度需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
- 按照样品质量计算
CarE 酶活(U/g 鲜重)= (△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总×（V 样总÷V 样）÷W÷T
= 67×(△A 测定管-△A 空白管)÷W
V 样总：上清液总体积，1 mL；V 样：加入上清液体积(mL)，0.005 mL；V 反总：1.005mL；
W：样品质量（g）；T：反应时间（min），3min。
- 细菌或细胞中 CarE 活性
CarE 酶活(U/104 cell)= (△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总×（V 样总÷V 样）÷细胞密度（104
cell/mL）÷T
= 67×(△A 测定管-△A 空白管)÷细胞密度（104 cell/mL）
V 总：上清液总体积，1 mL；V 样：加入上清液体积(mL)，0.005 mL；V 反总：1.005mL ；
T：反应时间（min），3min。
3. 液体中 CarE 活性
单位的定义：每毫升样品在 37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加 1 定义为 1 个酶活单位。
CarE 酶活(U/mL )= (△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总÷V 样÷T
= 67×(△A 测定管-△A 空白管)
V 样总：上清液总体积，1 mL；V 样：加入上清液体积(mL)，0.005 mL；V 反总：1.005mL；
T：反应时间（min），3min。
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