- ￥1260
- Xkbio
- XK-SJH-A335
- 国产
- 2025年07月15日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
33
- 英文名：
Mitochondrial respiratory chain complex Ⅲ/CoQ-cytochrome C reductase test kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
25管/24样
线粒体复合体Ⅲ试剂盒
分光光度法 25 管/24 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义
线粒体复合体Ⅲ（EC 1.10.2.2）又称 CoQ-细胞色素C 还原酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，是线粒体呼吸电子传递链主路和支路的共有成分，负责把还原型 CoQ 的氢传递给细胞色素 C，生成还原型细胞色素 C。
测定原理
与氧化型细胞色素 C 不同，还原型细胞色素 C 在 550nm 有特征光吸收，因此 550nm 光吸收增加速率能够反映线粒体复合体Ⅲ酶活性。需自备的仪器和用品
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。试剂的组成和配制
试剂一：25mL×1 瓶，-20℃保存； 试剂二：5mL×1 瓶，-20℃保存； 试剂三：0.5 mL×1 支，-20℃保存；试剂四：液体 20mL×1 瓶，4℃保存； 试剂五：粉剂×1 支，-20℃保存；
试剂六：液体 2.5mL×1 瓶，-20℃保存；
样本的前处理：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：1、 准确称取 0.1g 组织或收集 500 万细菌或细胞，加入 1mL 试剂一和 10uL 试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
2、 将匀浆 600g，4℃离心 5min。
3、 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心 10min。
4、 上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅲ（此步可选做）。
5、 步骤④中的沉淀即为线粒体，加入 200uL 试剂二和 2uL 试剂三，超声波破碎（冰浴， 功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10 秒，重复 30 次），用于复合体Ⅲ酶活性测定。
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测定步骤：
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 550nm，蒸馏水调零。2、 样本测定
- 工作液的配制：临用前把试剂五转移到试剂四中混合溶解，置于 37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）孵育 5min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
- 在 1mL 玻璃比色皿中加入 40μL 样本、100μL 试剂六和 800μL 工作液，立即混匀， 记录 550nm 处初始吸光值 A1 和 2min 后的吸光值 A2，计算 ΔA=A2-A1。
复合体Ⅲ活力单位的计算：
- 按样本蛋白浓度计算
复合体Ⅲ活力(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V 样) ÷T=615×ΔA÷Cpr
- 按样本鲜重计算
÷T=124×ΔA÷W
- 按细菌或细胞密度计算
复合体Ⅲ活力(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=0.248×ΔA V 反总：反应体系总体积，9.4×10-4 L；ε：细胞色素 C 摩尔消光系数，1.91×104 L / mol /cm； d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.04 mL；V 样总：加入提取液体积，0.202 mL； T：反应时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万。
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文献和实验可以看出CoQ在复合物Ⅰ与Ⅲ，Ⅱ与Ⅲ之间传递还原当量，Cyt c在复合物Ⅲ与Ⅳ之间传递还原当量。他们又将这四种复合物1：1：1：1的比例混合，加上CoQ和Cyt c重组，基本上恢复了线粒体原有的催化能力。 借助上述 实验方法 ，呼吸链各组分的排列顺序已基本明确，但仍有些不一致的看法，其中以CoQ至细胞色素C这一部分研究得还很不清楚，对于Fe-S和CoQ的定位和数量也有争议。 (二)氧化呼吸链 1.NADH氧化呼吸链 人体
可以看出CoQ在复合物Ⅰ与Ⅲ，Ⅱ与Ⅲ之间传递还原当量，Cyt c在复合物Ⅲ与Ⅳ之间传递还原当量。他们又将这四种复合物1：1：1：1的比例混合，加上CoQ和Cyt c重组，基本上恢复了线粒体原有的催化能力。 借助上述 实验方法 ，呼吸链各组分的排列顺序已基本明确，但仍有些不一致的看法，其中以CoQ至细胞色素C这一部分研究得还很不清楚，对于Fe-S和CoQ的定位和数量也有争议。 (二)氧化呼吸链 1.NADH氧化呼吸链 人体
可逆性ATP酶，能在外能驱动下逆浓差转运H 。线粒体内膜呼吸链中有三个酶复合体具有质子泵功能，能将H 由内腔转运到外腔，它们是：细胞色素c氧化酶、辅酶QH2 - 细胞色素c还原酶、NADH- 辅酶Q还原酶。细菌的的质膜上普遍有质子泵，有的伴有呼吸链组分。嗜盐菌膜上的菌紫质（bacteriorhodopsin）受光照驱动，可将H 运入菌体内浓集。
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