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总巯基测试盒

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  • 2025年07月14日
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      100

    • 英文名

      Total sulfhydryl test kit

    • CAS号

    • 保质期

      1年

    • 供应商

      上海晅科生物科技有限公司

    • 保存条件

      2-8℃

    • 规格

      100管/48样

    产品细节图片1
    总巯基测定试剂盒

    微量法 100T/48S

    注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。测定意义:
    生物体内巯基主要包括谷胱甘肽巯基和蛋白质巯基。前者不仅能够修复氧化损伤的蛋白质, 而且参与活性氧清除,后者对于维持蛋白质构象具有重要作用。通过测定总巯基含量和 GSH 含量,能够间接测定蛋白质巯基含量。

    测定原理:

    巯基基团与 5,5’-二硫代-双-硝 苯甲酸(DTNB)反应,生成黄色化合物,在 412nm 处有最大吸收峰。

    自备实验用品:

    天平、研钵、恒温水浴锅、酶标仪、96 孔板、乙醇和蒸馏水。

    试剂组成和配制:

    试剂一:液体 18mL×1 瓶,4℃保存。
    试剂二:液体 1mL×1 管,4℃避光保存。

    样品的制备:

    1. 按照组织质量(g):水体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL
    蒸馏水)进行冰浴匀浆,然后 8000g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
    1. 血清,培养液:稀释 5 倍后测定,可取 0.1mL 样本,加入 0.4mL 蒸馏水,混匀,置冰上待测。

    操作步骤:

    1、 酶标仪预热 30min,调节波长至 412nm。
    2、操作表
    在 96 孔板中加入如下试剂
      对照管 测定管
    样品(μL) 40 40
    试剂一(μL) 150 150
    试剂二(μL)   10
    乙醇(μL) 10  
    混匀,25℃静置 10min,测定 412nm 吸光值。ΔA=A 测定-A 对照。每个测定管设一个对照管。

    相关图片:
    产品细节图片2产品细节图片3

    计算公式:

    总巯基标准曲线:y = 1.8111x - 0.0037,R2 = 1,x 为标品浓度,单位 μmol/mL,y 为吸光度ΔA。
    1. 组织:
    1. 按样本重量计算
    总巯基含量(μmol/g 鲜重)=(ΔA+0.0037)÷1.8111×V 样总÷W
    =0.552×(ΔA+0.0037)÷W

     
    1. 按样本蛋白浓度计算
    总巯基含量(μmol/mg prot)=(ΔA+0.0037)÷1.8111×V 样总÷Cpr
    =0.552×(ΔA+0.0037)÷Cpr

     
    1. 血清、培养液:
     
    总巯基含量(μmol/L)=(ΔA+0.0037)÷1.8111×5×103
    =2761×(ΔA+0.0037)

    V 样总:加入提取液体积,1mL;W:样品质量,g ;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;5:血清,培养液等液体样本稀释倍数;103 :1mmol/ L=103μmol/ L
    注意事项
    最低检出限为 10μmol/L。

    产品细节图片4

     

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