酸性磷酸酶（ACP）测试盒

酸性磷酸酶（ACP）活性测定试剂盒

微量法 100T/48S

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

ACP 在酸性条件下催化磷酸单酯水解称无机磷酸，常见于巨噬细胞的溶酶体内。ACP 常用于前列腺癌的辅助诊断。

测定原理：

在酸性环境中，ACP 催化对硝基ben磷酸二钠水解生成 4-硝基ben酚，在 405nm 有特征光吸收；通过测定 405nm 吸光度增加速率，来计算ACP 活性。

自备仪器和用品：

酶标仪、96 孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：液体 60 mL×2 瓶，4℃保存。试剂二：液体 50 mL×1 瓶，4℃保存。试剂三：液体 50 mL×1 瓶，4℃保存。粗酶液提取：

1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1 mL 试剂一）进行冰浴匀浆，4℃、10000g 离心 10 min，取上清液待测。
2. 细菌或细胞：按照细菌或细胞数量（104 个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1  的比例（建议 500 万细胞加入 1 mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3 min）；然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
3. 血液可直接测定，或者适当稀释后测定。

测定：

1. 酶标仪预热 30 min，调节波长到 405 nm。
2. 在 EP 管中加入下列试剂

试剂名称（μL）	测定管	对照管
样本	10	10
试剂一	90	990
试剂二	900
30℃避光保温 30 min
试剂三	400	400

混匀，吸取 200µL 加入 96 孔板中，405 nm 下测定各管吸光值。ΔA=A 测定管-A 对照管。注意：每个测定管需做一个对照管。

相关图片：

ACP 活性计算：

标准曲线 y = 7.3336x + 0.0179；R2 = 0.9996；x 为标准品浓度（μmol/mL），y 为吸光值ΔA。

1. 血液中ACP 活性计算

活性单位定义：30℃中每毫升血液每分钟催化产生 1μmol 4-硝基ben酚定义为 1 个酶活单位。
ACP 活力(μmol/min/mL)=（ΔA-0.0179）÷7.3336 ×V 反总÷T÷V 样
= 0.4545 ×（ΔA-0.0179）

2. 组织、细菌或细胞中 ACP 活性计算

1. 按照蛋白浓度计算

活性单位定义：30℃中每毫克蛋白每分钟催化产生 1 μmol 4-硝基ben酚定义为 1 个酶活单位。