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- XK-SJH-A783
- 国产
- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
33
- 英文名：
Pyrophosphate: Fructose-6-phosphate-1-phosphate transferase (PFP) test kit
- CAS号：
无
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
50管/48样
焦磷酸：果糖-6-磷酸-1-磷酸转移酶（Pyrophosphate: fructose-6 – phosphate-1-phosphoric acid transferase，PFP）试剂盒说明书
分光光度法 50 管/48 样注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义焦磷酸：果糖-6-磷酸-1-磷酸转移酶（PFP，EC2.7.1.90）是一种胞质酶，广泛存在于植物组织中，催化果糖-6-磷酸与果糖-1,6-二磷酸之间的可逆转化，在光合作用碳代谢中起重要作用。
测定原理
PFP 催化 6-磷酸果糖转化为 1,6-二磷酸果糖，它在醛缩酶和磷酸丙糖异构酶的作用下转变为3-磷酸甘油醛，再由 3-磷酸甘油醛脱氢酶和 NADH 催化生成 3-磷酸甘油酸、NAD 和磷酸，340nm 处的吸光度变化反映了 PFP 的活性的高低。
自备实验用品及仪器
天平、低温离心机、研钵、紫外分光光度计、1 mL 石英比色皿。试剂组成和配制
提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。试剂一：液体 30mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 5mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂三：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 5 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂四：液体 0.5mL×1 瓶，4℃避光保存。试剂五：液体 0.5mL×1 瓶，4℃避光保存。试剂六：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。酶液提取
1. 组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1mL
提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于 4℃，10000g 离心 10min，取上清置冰上待测。2. 细胞：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500
万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 4℃，10000g 离心 10min，取上清置冰上待测。
3. 液体：直接检测。
测定操作
- 分光光度计预热 30min，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
- 取 1mL 石英比色皿，依次加入 580μL 试剂一，100μL 试剂二，100μL 试剂三，10μL 试剂四，10μL 试剂五，100μL 试剂六，100μL 粗酶液，充分混匀，记录 340nm 处 10s 的吸光值 A1 和 310s 的吸光值 A2，△A=A1-A2
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计算公式
- 按照样本蛋白浓度计算
PFP（nmol/min/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr
- 按照样本质量计算
PFP（nmol/min /g 鲜重）=ΔA÷（ε×d）×V 反总÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=321.54×ΔA÷W
- 按照细胞数量计算
PFP（nmol/min /104 cell）= ΔA÷（ε×d）×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V 样总) ÷T
=321.54×ΔA÷细胞数量
- 按照液体体积计算
PFP（nmol/min /mL）=ΔA÷（ε×d）×V 反总÷V 样÷T=321.54×ΔA
V 反总：反应体系总体积，1mL；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.1mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g
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文献和实验黄素腺嘌呤二核苷酸 flavin（e） adenine dinuclectide
亦称核黄素腺嘌呤二核苷酸或异咯嗪腺嘌呤二核苷酸，缩写为 FAD。由核黄素（维生素 B2 ）和二个磷酸基及腺苷组成的二核苷酸。广泛分布在好氧生物和厌氧生物的体内。同黄素单核苷酸一样，在生物氧化过程中，对电子的传递起着重要的作用，即作为黄素酶类的辅酶而起作用，参与电子从底物到电子接受体的传递。在 450、 375和 260纳米处具有吸收带，但一旦与蛋白质部分结合，一般吸收带便离去原来的状态。 FAD在生物体内，可由 FMN和 ATP通过焦磷酸化酶（ FMN腺苷酰（基）转移酶
胞苷一磷酸-N－乙酰神经氨酸cytidine monophosphate N－acetylneuraminic acid
简写为 CMP－ N-乙酰神经氨酸。 N-乙酰神经氨酸是一种多糖，特别是其作为分泌在动物细胞表面或细胞外的糖蛋白质和糖脂质末端的糖成分而广泛地分布着。其末端残基是通过总称为唾液酸转移酶（ sialyltransfer－ ase）的酶从这种 CMP－ N-乙酰神经氨酸转移而来。一般具有这种机能的糖核苷酸，是糖结合到核苷二磷酸上，但仅 CMP－ N-乙酰神经氨酸是例外。 CMP－ N-乙酰神经氨酸是通过专性的焦磷酸化酶的作用从 CTP和 N-乙酰神经氨酸进行生物合成的。极
酵解过程中的中间产物而进入糖酵解代谢途径。在上述反应中，限制果糖代谢的主要酶是磷酸酶B，此酶催化效率低，过量果糖可引起1�磷酸果糖堆积而导致肝脏损害，出现低血糖、呕吐、黄疸、出血等以及高尿酸症和痛风。半乳糖来自牛乳中乳糖的水解，可由半乳糖激酶催化生成1�磷酸半乳糖。 1－磷酸半乳糖可在1－磷酸半乳糖尿苷酰转移酶催化下与尿嘧啶核苷二磷酸葡萄糖(UDPG)作用，生成1�磷酸葡萄糖和尿嘧啶核苷二磷酸半乳糖(UDp Gal)。 UDPG+1�磷酸半乳糖←→1－磷酸葡萄糖+UDPGal
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